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Bioatividade dos ácidos retinoico e ascórbico e carregamento em hidrogel termosensível sintético para regeneração endodôntica

Processo: 22/07140-1
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Mestrado
Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2022
Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2024
Área de conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia - Materiais Odontológicos
Pesquisador responsável:Josimeri Hebling Costa
Beneficiário:Lídia de Oliveira Fernandes
Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOAr). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
Assunto(s):Ácido ascórbico   Expressão gênica   Hidrogéis   Indutores da angiogênese   Regeneração tecidual guiada   Ácido retinoico   Odontologia regenerativa
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:ácido ascórbico | expressão gênica | Hidrogéis | Indutores da angiogenese | Regeneração tecidual guiada | Tretinoína | Odontologia regenerativa

Resumo

Dentes jovens, especialmente aqueles com rizogênese incompleta, apresentam alta capacidade regenerativa por apresentarem uma via direta de suprimento sanguíneo e uma rica fonte de células progenitoras provenientes da papila apical. Por esse motivo, procedimentos endodônticos regenerativos têm sido investigados para preservar e estimular essas células para desenvolver um novo complexo dentina-polpa. Nesse sentido, busca-se encontrar uma estratégia que, após desinfecção do canal radicular, permita a continuidade do processo de formação radicular com fechamento apical, devolvendo a homeostase, inervação e revascularização, visando promover a regeneração do tecido perdido. Ademais, a estabilidade e resistência mecânica do elemento dental depende do comprimento e da espessura das paredes dentinárias do conduto radicular. Para essa finalidade, hidrogéis de origem natural (como baseados em colágeno) associados a fatores de crescimento têm sido propostos como scaffolds para facilitar os processos regenerativos, demonstrando resultados promissores. No entanto, questionamentos imunogênicos e relacionados à viabilidade comercial são levantados acerca do uso de polímeros naturais e fatores de crescimento para essa finalidade. Diante deste cenário, é pertinente a investigação de moléculas sintéticas bioativas que, associadas a hidrogéis sintéticos, sinalizem a migração e sirvam como abrigo de células progenitoras da papila apical para promover eventos compatíveis com regeneração endodôntica. Portanto, este projeto busca avaliar o efeito bioativo do ácido retinoico (AR) e do ácido ascórbico (AA) e formular um hidrogel termosensível sintético carregado com dosagens bioativas dessas moléculas para regeneração endodôntica. Para tanto, três estudos sequenciais e interligados foram delineados. No Estudo 1, será investigado o efeito bioativo dose-reposta do AR e AA sobre células da papila apical humana (hAPCs). Ainda, as mesmas dosagens serão testadas em células endoteliais humanas (HUVECs) para avaliar o potencial angiogênico in vitro. No Estudo 2, serão formulados hidrogéis termosensíveis sintéticos citocompatíveis com hAPCs. Por fim, no Estudo 3, a molécula que obtiver maior efeito bioativo será incorporada à formulação estabelecida do hidrogel, e os biomateriais serão aplicados em segmentos radiculares de incisivos bovinos, onde hAPCs e HUVECs serão cocultivadas para avaliação da regeneração pulpar in situ. Serão conduzidos ensaios de viabilidade/proliferação (alamarBlue e Live/Dead), adesão/espalhamento (imunomarcação de actina), migração celular ativa (transwell), regulação da expressão gênica (RT-qPCR) e síntese de proteínas (imunofluorescência) de interesse para regeneração endodôntica. O número de repetições para cada protocolo foi baseado em estudos prévios e será calculado de acordo com dados obtidos na primeira ocasião experimental, podendo ser ajustado para cada protocolo. Os dados serão submetidos a análises estatísticas específicas após verificação do tipo de distribuição amostral (Shapiro-Wilk) e homogeneidade de variâncias (Levene). Inferências estatísticas serão feitas considerando o nível de significância de 5%.

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