Desenvolvimento de sistemas de expressão de baixo custo para produção da t5 exonuclease

• Processo: 22/12656-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2022
• Data de Término da vigência: 01 de abril de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Danielle Biscaro Pedrolli
• Beneficiário: Lucas Moita Paim
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 23/06171-3 - Otimização da fermentação de B. subtillis KO7 utilizando substratos de baixo custo em micro-biorreatores, BE.EP.IC
• Assunto(s): Bacillus subtilis Escherichia coli Expressão heteróloga Biologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bacillus subtilis | Escherichia coli | exonuclease | expressão heteróloga | Gibson assembly | Biologia Molecular

Resumo

A biotecnologia moderna emprega amplamente microrganismos modificadosgeneticamente pelo uso da clonagem gênica. Dentre todos os procedimentos envolvidosna clonagem gênica, os que mais apresentam dificuldades são a digestão por enzimasde restrição seguida da ligação de moléculas de DNA. As clonagens são comumentedesenvolvidas usando os métodos tradicionais de digestão por enzimas de restrição eligação de DNA. Mas já existem métodos mais modernos como Golden Gate Assembly.Este apresenta vantagens em relação ao método tradicional, como o uso de apenas umaenzima de restrição do tipo IIS e maior eficiência. Mas apresenta ainda a dificuldade naclonagem de sequencias que contém internamente os sítios de restrição das poucasenzimas tipo IIS disponíveis no mercado. Por outro lado, o método Gibson Assembly,amplamente utilizado nos laboratórios pelo Mundo, é muitas vezes inacessível paralaboratórios no Brasil, devido principalmente ao alto custo e aos prazos de entregaextensos dos produtos importados. Neste contexto, é proposto o desenvolvimento desistemas de expressão do único componente do kit Gibson Assembly que não éproduzido no Brasil, a T5 exonuclease. Com isso, pretendemos viabilizar a produção dokit em território nacional a preços e prazos mais acessíveis. Além disso, odesenvolvimento será open source, permitindo o desenvolvimento do kit para qualquerlaboratório nacional.