Caracterização molecular de duas aquaporinas hipoteticamente envolvidas no transporte de água, ureia e glicerol no intestino médio de Rhodnius prolixus

• Processo: 23/04101-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Walter Ribeiro Terra
• Beneficiário: Ignacio Granja Barroso
• Supervisor: Joan Cerda
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Universitat Autònoma de Barcelona (UAB), Espanha
• Vinculado à bolsa: 19/22451-0 - Transportadores associados à fisiologia intestinal em Tenebrio molitor, Rhodnius prolixus e Dysdercus peruvianus, BP.PD
• Assunto(s): Rhodnius prolixus Caracterização molecular Diurese Sangue
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Eglp | glycerol absorption | postprandial diuresis | Prip | Rhodnius prolixus | Caracterização molecular

Resumo

A ingestão de sangue ativa em Rhodnius prolixus uma cascata de eventos hormonalmente coordenados, envolvendo diferentes tecidos para eliminar excesso de água e cloreto de sódio do sangue ingerido. A diureses pós-prandial estimula o inseto a urinar/defecar, reduzindo assim seu peso corporal, evitando assim ser depredado, e permitindo a digestão do sangue. Quando infectado pelo parasita Trypanosoma cruzi, este sai com as fezes e eventualmente infecta o hospedeiro, causando a doença de Chagas. Dois principais tecidos estão envolvidos neste processo, o intestino médio anterior que absorve água e cloreto de sódio e os túbulos de Malpighi que os secretam. Depois de reduzir o volume de sangue na região anterior do intestino médio, a digestão de macromoléculas e a absorção de nutrientes ocorre principalmente nas regiões média e posterior do intestino médio. Resultados preliminares mostrados no último relatório científico mostraram a expressão específica dos genes RpPrip e RpEglp1 no intestino médio, com maior expressão nas regiões anterior e posterior, respectivamente. Além disso, as análises bioinformática e filogenética de suas respectivas sequencias de aminoácidos sugere que estas proteínas poderiam agir como transportadores de água e ureia e água, ureia e glicerol, respectivamente, indicando um papel potencial de RpPrip na diureses do intestino médio anterior e de RpEglp1 no transporte de glicerol na região posterior do intestino médio de R. prolixus. O presente projeto visa caracterizar as propriedades biofísicas dos genes RpPrip e RpEglp1 através da expressão ectópica dos seus respectivos cRNAs em ovócitos de Xenopus laevis, confirmando assim seu papel no intestino médio de R. prolixus. A permeabilidade a água e solutos de RpPrip e RpEglp será testada em experimentos de swelling realizados em ovócitos. Em ambos os casos, os aminoácidos chave que determinam a função do canal serão identificados utilizando mutação sitio-dirigida. Os dados complementarão os atuais experimentos in vivo com inibidores, as imunomarcações, e as análises de expressão, desenhados para descobrir o papel fisiológico de RpPrip na diureses pós-prandial e de RpEglp na absorção de glicerol. (AU)