Análise in vivo da função de TrkA em embriões de galinha

• Processo: 23/04849-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Embriologia
• Pesquisador responsável: Deborah Schechtman
• Beneficiário: Felipe Monteleone Vieceli
• Supervisor: Marcos Simões Costa
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Harvard University, Boston, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 20/13929-1 - Efeito de mutações em TrkA associadas à CIPA nas vias de sinalização da dor e no desenvolvimento dos neurônios nociceptivos, BP.PD
• Assunto(s): Gânglios espinais Reconstrução tridimensional Neurodesenvolvimento Dor Dor nociceptiva
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: enhancer | Gânglio da raiz dorsal | nociceptor | Ntrk1 | Reconstrução 3D | Sequenciamento de células individuais | TrkA | Desenvolvimento Neural

Resumo

A sinalização da dor é conduzida por nociceptores, que derivam da crista neural e residem nos gânglios da raiz dorsal. A dor inflamatória depende da ativação dos receptores TrkA pelo NGF, iniciando vias de sinalização que levam ao disparo de potenciais de ação. A ativação de TrkA pelo NGF também promove a sobrevivência e diferenciação neuronal durante o desenvolvimento. Mutações em NTRK1, que codifica TrkA, causam insensibilidade congênita à dor devido à perda de nociceptores durante o desenvolvimento, ou diferenciação incompleta e sinalização sub-ótima no adulto. Embora mutações em NTRK1 tenham sido investigadas in vitro, não se sabe como afetam o desenvolvimento in vivo. Neste projeto, propomos gerar modelos de insensibilidade congênita à dor causada por TrkA em embriões de galinha. Resultados preliminares indicaram que TrkA poderia regular a migração da crista neural e colonização de alvos pré-diferenciação. Embora a sobrevivência celular possa ser estudada com imunomarcação de cortes transversais imunomarcados, análises abrangentes de migração da crista neural e diferenciação de nociceptores in vivo por reconstrução 3D ou filmagem, idealmente por microscopia de fluorescência de folha de luz, requerem disponibilidade de equipamento e software específicos que não estão prontamente disponíveis no Brasil. Além disso, nosso projeto poderia se beneficiar amplamente da identificação de enhancers de nociceptores capazes de direcionar a expressão transgênica. Para alcançar esses objetivos, propomos um estágio de um ano no laboratório do Dr. Marcos Simões-Costa, na Harvard Medical School (Boston, MA, EUA), onde microscópios de última geração estão disponíveis para uso frequente e dados de RNA-Seq e ATAC-Seq de células únicas de neurônios sensoriais em desenvolvimento estão sendo gerados. Com esses resultados, esperamos determinar como mutantes de TrkA afetam processos específicos durante o desenvolvimento, potencialmente implicando vias de transdução de sinal reguladas pelo domínio alterado. (AU)