Validação e padronização de PCR microfluídica em tempo real de alto rendimento para a detecção de agentes transmitidos por vetores em aves silvestres do Pantanal brasileiro

• Processo: 23/08967-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal
• Pesquisador responsável: Marcos Rogério André
• Beneficiário: Amir Salvador Alabi Cordova
• Supervisor: Sara Moutailler
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Agence Nationale de Sécurité Sanitaire de l’Alimentation, de l’Environnement et du Travail (ANSES), França
• Vinculado à bolsa: 20/14948-0 - Detecção e caracterização molecular de agentes Anaplasmataceae, Bartonellaceae e Hepatozoidae em Passeriformes no Pantanal Brasileiro, BP.DR
• Assunto(s): Anaplasmataceae Bartonellaceae Parasitologia Pantanal Microfluídica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anaplasmataceae | Bartonellaceae | Haemosporidians | Hepatozoidae | High Throughput Microfluidic real-time PCR | standardization | parasitologia

Resumo

A composição das comunidades de aves tropicais resulta de uma combinação de espécies residentes permanentes, que vivem durante todo o ano em uma área específica, e espécies migratórias, que por sua vez estão presentes apenas sazonalmente em uma determinada região. Embora vários estudos realizados no Brasil tenham investigado a ocorrência e diversidade de hemosporídeos em aves silvestres no Brasil, a real ocorrência de outros agentes transmitidos por vetores (Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Trypanosoma e Hepatozoon) em aves no país permanece indefinida. A baixa ocorrência ou não identificação desses vetores pode estar associada à baixa sensibilidade das técnicas moleculares utilizadas para o diagnóstico em hospedeiros aviários, nos quais se espera baixa bacteremia/parasitemia. Ensaios de PCR microfluídica em tempo real surgiram como abordagens moleculares promissoras para desvendar a ocorrência e diversidade de agentes transmitidos por vetores em vetores artrópodes e hospedeiros vertebrados, devido à sua alta sensibilidade. Considerando a importância ecológica do Pantanal para as espécies de aves residentes e migratórias, o presente trabalho visa validar e/ou padronizar uma PCR microfluídica em tempo real para detecção de agentes transmitidos por vetores (Anaplasma, Ehrlichia, Bartonella, Hepatozoon, Plasmodium, Haemoproteus e Leucocytozoon) em amostras de sangue de aves coletadas no Pantanal, estado de Mato Grosso, centro-oeste do Brasil. Para tanto, foram selecionadas amostras de DNA de sangue aviário positivas para Ehrlichia, Anaplasma, Bartonella (originadas do atual projeto apoiado pelo projeto FAPESP nº 2020/14948-0), hemosporídeos e tripanossomas (dados não apresentados e associados ao projeto do Dr. Allan Fecchio ) será inicialmente usado para validar os protocolos microfluídicos de PCR em tempo real usados na unidade de pesquisa do Dr. Moutailler. Em caso de falta de amplificação dessas amostras positivas, cuja identidade molecular já foi confirmada por sequenciamento e análises filogenéticas, novos primers e sondas serão projetados para padronizar novos protocolos para capturar as novas variantes de agentes transmitidos por vetores que circulam na natureza aves do Brasil. Após validação e/ou padronização, ensaios microfluídicos de PCR em tempo real serão utilizados para triagem de 300 amostras de sangue de aves silvestres do Pantanal do estado de Mato Grosso (amostragem realizada em julho de 2022). O presente trabalho validará e/ou padronizará uma nova técnica molecular que nunca foi aplicada para rastrear amostras biológicas de aves silvestres no Brasil para agentes transmitidos por vetores. Adicionalmente, a proposta contribuirá para o entendimento da ocorrência de co-infecção por patógenos transmitidos por vetores em aves silvestres na maior área úmida tropical do mundo. (AU)