Caracterização do papel do fator de splicing Cwc24 em pré-mRNA em Saccharomyces cerevisiae

• Processo: 23/16763-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 06 de maio de 2024
• Data de Término da vigência: 05 de maio de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carla Columbano de Oliveira
• Beneficiário: Moises Ricardo de Almeida Barros
• Supervisor: Manuel Ares Jr
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of California, Santa Cruz (UC Santa Cruz), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 21/14137-4 - Caracterização do papel do fator geral de splicing CWC24 em pré-mRNA em Saccharomyces cerevisiae, BP.DD
• Assunto(s): Splicing
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cwc24 | SF3a | snRNA | Spliceosome | Splicing

Resumo

O spliceossomo é o complexo ribonucleoprteico responsável por catalisar as reações de splicing de pré-mRNAs em eucariotos. Dentre os componentes do spliceossomo, a proteína Cwc24 desempenha um papel importante na regulação do splicing, se ligando ao sítio de splicing 5' (5'SS), protegendo este sítio de reações prematuras. Nosso laboratório demonstrou que Cwc24 é um fator geral de splicing e que a maturação do U3 snoRNA é o evento de splicing mais afetado pela depleção de Cwc24. Como o pré-U3 possui um sítio de ramificação (BS) não-consenso, hipotetizamos que Cwc24 promova a função de U2 snRNP ao reconhecer o BS durante a montagem do spliceossomo. Para analisar o efeito da ausência de Cwc24 na função do spliceossomo, comparamos a composição proteica do spliceossomo, por espectrometria de massas, na ausência e presença Cwc24, em diferentes estágios do ciclo de splicing. Os resultados obtidos indicam que, na ausência de Cwc24, houve um acúmulo de proteínas SF3a. Como este subcomplexo é removido pela ação de Prp2, é possível que a ação desta helicase esteja comprometida, prejudicando a formação da conformação catalítica do spliceossomo e, consequentemente, pausando o complexo antes da primeira reação de transesterificação. Como SF3a é um componente de U2 snRNP, é possível que esta estabilização esteja associada às mudanças conformacionais que ocorrem com o U2 snRNA. Para confirmar essas observações, este projeto propõe estudar os mecanismos que levam ao travamento do spliceossomo na ausência de Cwc24, avaliando como diferentes conformações do U2 snRNA podem influenciar neste processo.