Otimização da Função e Infiltração de Linfócitos CAR T no Tratamento de Carcinomas Renais

• Processo: 23/00925-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Eloah Rabello Suarez
• Beneficiário: Najla Santos Pacheco de Campos
• Instituição Sede: Centro de Ciências Naturais e Humanas (CCNH). Universidade Federal do ABC (UFABC). Ministério da Educação (Brasil). Santo André , SP, Brasil
• Assunto(s): Anidrase carbônica IX Integrinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anidrase carbônica IX | Car T | carcinoma renal | Exaustão de linfócitos T | integrinas | Tumores Sólidos | Car T

Resumo

RESUMO. Linfócitos T (LT) capazes de expressar receptores quiméricos de antígeno (CAR) vêm demonstrando notável eficácia clínica no tratamento de diferentes tumores hematológicos. Contudo, diversos desafios necessitam ser superados para que sejam eficientes contra tumores sólidos, destacando-se a migração ineficiente das células CAR T para os sítios tumorais e a frequente imunossupressão local que limita a atividade citotóxica dos LT. Vários tumores hipóxicos e especialmente o carcinoma renal de células claras (ccRCC) superexpressam uma enzima denominada anidrase carbônica IX (CAIX), considerada um alvo relevante para o desenvolvimento de células CAR T. Este projeto apresenta duas propostas integradas, sendo a primeira a determinação dos efeitos anti-tumorais de células CAR T Anti-CAIX em condições otimizadas contendo domínios co-estimulatórios CD28 ou 4-1BB, capazes de induzir diferentes níveis de exaustão de LT, em modelo de xenoenxertos de ccRCC derivados de pacientes (PDX). A segunda proposta consiste na adaptação das CAR T que demonstrarem maior eficiência nos modelos anteriores para co-expressarem enzimas moduladoras de integrinas no segundo cassette do mesmo lentivetor carreador do CAR, através de clonagem molecular. Tais enzimas são capazes de remodelar o citoesqueleto de células imunes por modificação de integrinas, promovendo adesão e migração transendotelial dos LTs em direção ao tumor. Os lentivírus serão produzidos por transfecção transiente, concentrados, titulados e transduzidos em LT CD4:CD8 2:1 purificados da fração mononuclear do sangue de doadores saudáveis. As CAR T resultantes terão sua capacidade de proliferação e transdução avaliadas. As células CAR T Anti-CAIX serão avaliadas in vivo em modelo PDX de ccRCC, com determinação do status de exaustão dos LT infiltrados no tumor (TIL). As CAR T Anti-CAIX que co-expressarem enzimas moduladoras serão testadas in vitro em modelos de atividade de enzimas, migração transendotelial e citotoxicidade de células de ccRCC e in vivo em modelo ortotópico humanizado de ccRCC e/ou PDX, com determinação da quantidade e status de ativação das CAR T infiltradas no tumor. Este projeto apresenta potencial para solucionar um dos principais desafios atuais da terapia com células CAR T contra tumores sólidos, impulsionando a infiltração e otimizando a performance das CAR T no microambiente tumoral.