ENGENHARIA DE SECRETOMA: MODIFICAÇÃO DE CÉLULAS COM Cas13 PARA ESTÍMULO DA ANGIOGÊNESE

• Processo: 24/00042-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Roberta Sessa Stilhano Yamaguchi
• Beneficiário: Sara Carolina Vieira Terra
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas da Santa Casa de São Paulo (FCMSCSP). Fundação Arnaldo Vieira de Carvalho. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Angiogênese Doença arterial periférica Terapia baseada em transplante de células e tecidos Terapia genética Vesículas extracelulares
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: angiogenese | CRISPR-Cas13 | Doença arterial periférica | terapia celular | terapia genica | vesículas extracelulares | Terapia Gênica e Celular

Resumo

A Doença Arterial Periférica (DAP) é um distúrbio clínico decorrente da estenose ou oclusão de artérias nos membros superiores ou inferiores. As atuais estratégias e a farmacoterapia tradicional para tratamento da DAP, sem neovascularização, possuem evidências limitadas, especialmente na prevenção de amputações - o pior desfecho desta doença. Por outro lado, a terapia gênica ou celular para estímulo à angiogênese estudada até o momento também não mostrou resultados consistentes em grandes ensaios clínicos randomizados.Sabe-se hoje que o fator induzível por hipóxia (HIF) é um agente protagonista na coordenação da resposta celular à hipóxia e que as enzimas de domínio prolil hidroxilase de HIF (PHDs) desempenham papel chave na degradação de HIF±. A downregulação das PHDs via terapia gênica visando à estabilização do HIF desponta como um possível alvo terapêutico para DAP.Dentre as diversas ferramentas de terapia gênica, o sistema CRISPR- Cas13d, desponta como o mais promissor, sendo que a proteína efetora Cas13 é capaz de regular a expressão de um gene alvo por meio da clivagem de seu mRNA.Ainda, a terapia celular convencional até o momento, empregada para o tratamento da DAP,também se mostrou limitada. Sabe-se que as células tronco derivadas de tecido adiposo (ADSC) apresentam enorme potencial angiogênico, principalmente por meio de suas vesículasextracelulares, que são comprovadamente capazes de promover angiogênese e de diminuir inflamação e apoptose celular.Dessa forma o presente estudo visa aplicar a ferramenta de clivagem de Cas13, para downregulação da enzima prolil 4-hidrolixase 2 de HIF (PHD2), agente de destaque na inibição da angiogênese, a fim de aumentar a expressão de genes angiogênicos em linhagem decélulas endoteliais HUVEC e em linhagem de células tronco ADSC. Após a edição, será avaliada a expressão gênica e proteica, capacidade de migração e de angiogênese, in vitro, das HUVECmodificadas e das vesículas extracelulares (exossomos) das ADSC modificadas.