Análise Proteômica e Metabólica de Neutrófilos de Pacientes Sépticos

• Processo: 23/15909-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Reinaldo Salomão
• Beneficiário: Mônica Bragança Sousa
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/21052-0 - Sepse: mecanismos, alvos terapêuticos e epidemiologia, AP.TEM
• Assunto(s): Imunometabolismo Metabolismo Neutrófilos Proteômica Resposta imune Sepse
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Imunometabolismo | metabolismo | neutrófilos | proteômica | resposta imune | sepse | Imunometabolismo

Resumo

A sepse é um problema de saúde pública que apresenta elevada morbidade e mortalidade, sendo uma das principais causas de óbito nas unidades de terapia intensiva. Esta condição, definida como uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção, tem os neutrófilos como uma das primeiras linhas de defesa contra patógenos. Os neutrófilos são prioritários no foco da lesão e mesmo em condições metabólicas adversas são capazes de suprir grandes demandas armazenando energia através da gliconeogênese. Há diversos trabalhos que demonstram a dependência glicolítica dos neutrófilos na imunomodulação da sepse, no entanto, esse papel regulatório ainda é pouco explorado e estudos sugerem que neutrófilos disfuncionais contribuem para maior mortalidade. O objetivo desse projeto é caracterizar o perfil proteômico dos neutrófilos de pacientes com sepse e utilizar as alterações das vias metabólicas como referência para a realização de estudos funcionais, direcionados com uso de inibidores específicos para qualificar as vias relacionadas a resposta celular e entender como a capacidade metabólica influencia a ativação e resposta dessas células. Para a análise proteômica selecionamos amostras de 59 pacientes sépticos e 11 controles sadios provenientes do nosso biorrepositório. As análises LC-MS/MS foram realizadas no sistema Orbitrap Fusion Lumos (Thermo), os dados brutos foram processados usando o Proteome Discoverer Suite e analisados no software R. A avaliação da contribuição das vias metabólicas na função celular será feita com o bloqueio das principais vias de suporte, como 2DG, por meio de citometria de fluxo multiparâmetro. Para realização destes experimentos contamos com uma rede de coleta de sangue de pacientes sépticos que fazem parte do projeto temático FAPESP 2017/21052-0 e com o uso do citômetro LSRFortessa (BD) de quatro lasers, capaz de ler até doze fluorocromos, onde serão realizados testes de produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), armadilhas extracelulares (NETs), fagocitose e captação de glicose. Avaliaremos também o consumo de oxigênio e a acidificação extracelular através do analisador metabólico em tempo real Seahorse XFe (Agilent). Nossos resultados preliminares de análise proteômica mostram que as vias mais alteradas estão relacionadas com o sistema imune, com a degranulação dos neutrófilos e com as vias metabólicas, indicando uma regulação dessas proteínas que influenciam a função celular dos neutrófilos de pacientes. A melhor compreensão da resposta imunológica na sepse pode direcionar mecanismos de redução da resposta exacerbada causadora de danos.