Identificação de substratos fisiológicos das Neks 1,4,6,8,10 e 11 usando a abordagem de Shokat

• Processo: 24/04055-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Cintia Junia Monteiro
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/15126-9 - Duas famílias de proteínas reguladoras do ciclo celular: de estudos funcionais e uso como novos marcadores diagnósticos e alvos terapêuticos em câncer, AP.TEM
• Assunto(s): Neoplasias Proteínas quinases Sinalização
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | Proteina quinase | Sinalização | mecanismos de sinalização, câncer

Resumo

O câncer é uma das doenças que mais vitimizam humanos e animais domésticos. De acordo com o tecido e a célula afetada pelas mutações, um número grande de subtipos de câncer pode ser diferenciado. Num dado subtipo específico de câncer as causas moleculares são bastante heterogeneos e na maioria dos casos somente marginalmente mapeados. Isso representa ao mesmo tempo o maior desafio atual na área, mas também oferece imensas novas oportunidade para o diagnóstico e para novas abordagens terapêuticas. Proteína quinases de vias de sinalização e proteínas reguladoras da proliferação em geral são frequentemente alvos de mutações ativadoras ou inativadoras em câncer e contribuem para o processo de transformação. Nesse projeto focamos em duas famílias de proteínas reguladoras com grande potencial de utilidade tanto para o diagnostico como para a terapia de câncer. A primeira família consiste dos 11 membros da família de NEK proteína quinases, envolvidos na regulação do ciclo celular, da mitose, do cílio primário, mecanismos de reparo de DNA e funções mitocondriais. Apesar que várias proteínas interatoras das Neks 1,4,6,8,10 e 11 já foram descobertas por nosso e outros grupos de pesquisa, pouco se sabe sobre os substratos fisiológicos dessas Neks. A abordagem de Shokat prevê a geração de mutantes dos domínios de cinase que são sensitivos a análogos de ATP mais volumosos. A base de principio é a mutação de um resíduo alvo chamado "gatekeeper" , e.g. M80 para um resíduo menor como Alanina. Com isso somente a kinase mutada alvo é capaz de utilizar o análogo de ATP substrato. Posteriormente os peptídeos/proteína com resíduos fosforilados são identificados na espectrometria de massas. Para cada uma das 6 Neks estudas aqui selecionaremos 3 proteinas substratos alvos para gerar mutantes fosfomiméticos e fosfodeficientes para realizar estudos funcionais in vitro em células. Esses envolveram estudos de proliferação, sinalização, ciclo celular e apoptosis entre outros