Análise degradômica de proteínas do plasma humano alvejadas por proteases de Leptospira

• Processo: 23/11939-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Angela Silva Barbosa
• Beneficiário: Cassia Moreira Santos
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Leptospira
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: degradômica | Leptospira | Proteases extracelulares | Relação patógeno-hospedeiro

Resumo

Proteases estão entre os determinantes de virulência de uma série de patógenos de importância médica. Durante o processo infeccioso, há produção de proteases que possuem a capacidade de clivar ligações peptídicas levando a modificações estruturais irreversíveis, além de provocarem danos teciduais e inflamação excessiva. Os mecanismos subjacentes à entrada, disseminação, persistência e ao dano tecidual decorrentes da infecção por bactérias espiroquetas do gênero Leptospira - agente causador da leptospirose - ainda são pouco conhecidos, mas estudos realizados por nosso grupo são sugestivos de que proteases secretadas por esta bactéria contribuam para as diversas etapas do processo de colonização do hospedeiro. O maior entrave relacionado ao estudo de proteases de leptospiras tem sido a limitação no que diz respeito à identificação de substratos alvejados. Neste projeto, pretende-se aplicar a degradômica para estudar os efeitos de proteases secretadas por estas bactérias sobre moléculas do plasma humano. Dessa forma, o plasma será incubado com leptospiras ou com proteínas extracelulares secretadas pela bactéria. Os grupos N-terminais dos produtos de degradação serão inicialmente marcados utilizando a técnica TAILS (Terminal Amine Isotopic Labeling of Substrates) com o marcador isobárico TMT, reduzidos com DTT, alquilados com iodoacetamida e digeridos com tripsina. As amostras serão analisadas no espectrômetro de massas Orbitrap Exploris 480 acoplado ao nano-cromatógrafo líquido Vanquish Neo. A aplicação dessa abordagem proteômica baseada em espectrometria de massas para avaliar a interface Leptospira-hospedeiro pode gerar conhecimento sobre alterações que acontecem no plasma envolvendo moléculas da imunidade inata, da cascata de coagulação e de outras vias, abrindo perspectivas para a identificação de novos substratos e para melhorar nossa compreensão sobre os mecanismos utilizados por esta bactéria para causar doença in vivo. Ainda, resultados gerados poderão auxiliar no desenvolvimento de ferramentas terapêuticas para combater a doença.