Avaliação da expressão gênica de citocinas inflamatórias por qPCR em vacas leiteiras pós-secagem.

• Processo: 24/07129-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Clínica e Cirurgia Animal
• Pesquisador responsável: Wanderson Adriano Biscola Pereira
• Beneficiário: Mariana Arnaldi Petrosino
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Bovinos Citocinas Inflamação Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR) Clínica de grandes animais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovinos | citocinas | Inflamação | qPCR | Clínica de grandes animais

Resumo

Durante a secagem, a glândula mamária passa por involução ativa para retornar a um estado não lactante. A secagem abrupta, leva ao ingurgitamento dos ductos mamários e alterações na composição da secreção mamária, desencadeando um processo de involução que envolve morte celular programada e inflamação. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar expressão gênica TNF-±, IL-1² e IL-6 em vacas após a secagem, pela técnica de qPCR. Serão utilizadas vacas clinicamente saudáveis com produção leiteira superior a 15 kg/dia. Serão colhidas amostras de 20 mg tecido hepático por meio de biópsias percutâneas com agulhas tipo "Tru-Cut" guiadas por ultrassonografia. As amostras serão imediatamente acondicionadas em criotubos, colocadas em nitrogênio líquido e transportadas ao laboratório onde serão armazenadas a -80°C. A extração total do RNA será realizada a partir dos fragmentos hepáticos, utilizando colunas de centrifugação sendo posteriormente realizada a síntese de cDNA para as reações. Para quantificar a expressão de mRNA das proteínas de fase aguda, será utilizado um método de PCR em tempo real TaqMan com quantificação relativa. Um gene de referência (GAPDH), será processado simultaneamente na qPCR para cada amostra como um controle endógeno. A análise de variância One-Way ANOVA (p<0,05) será realizada para determinar diferenças na expressão gênica entre os momentos avaliados.