Expressão dos domínios de quinase das NEKs1,4,6,8,10 e 11 para a triagem bioquímico e celular in vitro na busca de novos inibidores anti-câncer

• Processo: 24/10662-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Bruno Henrique Ferreira Rodrigues
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/15126-9 - Duas famílias de proteínas reguladoras do ciclo celular: de estudos funcionais e uso como novos marcadores diagnósticos e alvos terapêuticos em câncer, AP.TEM
• Assunto(s): Neoplasias Proteínas quinases Sinalização
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | Proteina quinase | Sinalização | mecanismos de sinalização, câncer

Resumo

O câncer é uma das doenças que mais vitimizam humanos e animais domésticos. De acordo com o tecido e a célula afetada pelas mutações, um número grande de subtipos de câncer pode ser diferenciado. Num dado subtipo específico de câncer as causas moleculares são bastante heterogeneos e na maioria dos casos somente marginalmente mapeados. Isso representa ao mesmo tempo o maior desafio atual na área, mas também oferece imensas novas oportunidade para o diagnóstico e para novas abordagens terapêuticas. Proteína quinases de vias de sinalização e proteínas reguladoras da proliferação em geral são frequentemente alvos de mutações ativadoras ou inativadoras em câncer e contribuem para o processo de transformação. Nesse projeto focamos nos membros Nek1,4,6,8, 10 e 11 da família de NEK proteína quinases humanas , envolvidos na regulação do ciclo celular, da mitose, do cílio primário, mecanismos de reparo de DNA e funções mitocondriais. Para obtenção de candidatos de inibidores novos para essas 6 Nek kinases realizaremos inicalmente screens de 5-10.000 compostos (inibidores quinases, fragmentos de alta diversidade química) dos domínios de quinase in vitro, usando tecnologia Lance ultra e equipamento Envision. As proteínas recombinantes serão obtidos por expressão em E. coli ou baculovirus. Com a identificação de candidatos de inibidores promissores realizaremos em seguida testes de confirmação da eficácia e estudos funcionais dos inibidores em células humanas. A geração de linhagens knock out pelo método Crispr das 6 Neks e sua complementação ou não com a expressão da quinase selvagem seriam os modelos usados. Um inibidor promissor por exemplo inibirá a proliferação, ou formação de clones, sinalização, ciclo celular (entre outros) em células complementadas mas não em células knock out. Assim se demonstraria a especificidade e eficácia do inibidor.