Obtenção da metacaspase (ScMCA-IA) de Saccharomyces cerevisiae contendo mutações sítio dirigidas do sítio de interação com o cálcio

• Processo: 24/05526-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Mauricio Ferreira Marcondes Machado
• Beneficiário: Emilly Rolim Leme
• Instituição Sede: Pró-Reitoria Acadêmica. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Campus da Sede Mogi das Cruzes. Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/06394-0 - Obtenção e caracterização bioquímica de metacaspases recombinantes de protozoários de interesse clínico, AP.R
• Assunto(s): Clonagem Expressão Mutação Purificação Enzimas proteolíticas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: clonagem | expressão | Interação com o cálcio | Metacaspase | mutação | purificação | Enzimas proteolíticas

Resumo

O presente projeto de pesquisa visa a produção da metacaspase de Saccharomyces cerevisiae (ScMCA-IA) contendo mutações sítio dirigidas nos resíduos de aspartato responsáveis pela interação do cálcio com essa enzima. A metacaspase ScMCA-IA sofre um auto-processamento para se tornar cataliticamente ativa, e necessita do íon cálcio como co-fator enzimático tanto para o seu autoprocessamento como para a realização de sua atividade enzimática. Estudos anteriores realizados por nosso grupo mostraram que a mutação de um único resíduo, demonstrou que apenas 3 dos 4 resíduos de aspartato demonstrados na estrutura 3D da ScMCA-IA, afetam na interação do Ca2+ com essa enzima, porém nenhum é crucial para a ligação desse co-fator. Por esse motivo pretendemos realizar a produção desta enzima contendo mutações sítio dirigidas nos quatro resíduos de aspartatos trocando por alanina, porém realizaremos a produção de 2 duplos mutantes (D253/283A e D236/283A), além de produzirmos um mutante dos quatro resíduos de aspartato (ScMCA-IA Asp-full), para tentarmos elucidar a importância do cálcio no auto-processamento e na regulação da atividade desta protease, tal estudo poderá contribuir para o design racional de moléculas que possa inibir e/ou ativar a ScMCA-IA sendo de grande importância pra o desenvolvimento de possíveis novos fármacos.