Produção de metacaspases de leveduras com truncamento do N-terminal e contendo mutações sítio dirigidas e caracterização bioquímica destas enzimas

• Processo: 19/05936-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de julho de 2019 - 31 de dezembro de 2021
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Mauricio Ferreira Marcondes Machado
• Beneficiário: Mauricio Ferreira Marcondes Machado
• Instituição Sede: Pró-Reitoria Acadêmica. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Campus da Sede Mogi das Cruzes. Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Maria Aparecida Juliano ; Wagner Alves de Souza Júdice
• Assunto(s): Clonagem Enzimas proteolíticas Cinética Substratos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cinética | clonagem | metacaspases | Mutações sítio dirigidas | substrato | Enzimas Proteolíticas

Resumo

O presente projeto de pesquisa é uma continuidade do projeto anterior, caracterização bioquímica de caspases-símile envolvidas no ciclo celular de eucariotos simples (FAPESP - 2015/11190-0), durante a execução do projeto observamos que as metacaspases de leveduras, que pertencem ao grupo I desta classe de enzimas, apresentam na porção N-terminal uma sequencia rica em glutamina e asparagina que promove a agregação proteica destas moléculas impossibilitando sua solubilidade e consequentemente impedindo a sua caracterização bioquímica. Por esse motivo esse projeto de pesquisa tem como objetivo a clonagem destas enzimas com a deleção da região N-terminal. As metacaspases sofrem um auto-processamento para tornarem-se cataliticamente ativas, e necessitam do íon cálcio como co-fator enzimático tanto para o seu auto-processamento como para realizarem sua atividade enzimática, por esse motivo pretendemos realizar a produção destas enzimas contendo mutações sítio dirigidas em resíduos chaves para atividade enzimática e nos locais de seu auto-processamento, para tentarmos elucidar a importância deste auto-processamento para a regulação da atividade destas proteases. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DALIO, FERNANDA M.; MACHADO, MAURICIO F. M.; MARCONDES, MARCELO F.; JULIANO, MARIA A.; CHAGAS, JAIR R.; CUNHA, RODRIGO L. O. R.; OLIVEIRA, VITOR. CPP-Ala-Ala-Tyr-PABA inhibitor analogs with improved selectivity for neurolysin or thimet oligopeptidase. Biochemical and Biophysical Research Communications, v. 522, n. 2, p. 368-373, FEB 5 2020. (19/05936-0, 18/09158-0)

JUDICE, WAGNER A. S.; FERRAZ, LETICIA SILVA; LOPES, RAYSSA DE MELLO; VIANNA, LUAN DOS SANTOS; SIQUEIRA, FABIO DA SILVA; DI IORIO, JULIANA F.; DALZOTO, LAURA DE AZEVEDO MAFFEIS; TRUJILHO, MARIANA NASCIMENTO ROMERO; SANTOS, TAIZ DOS REIS; MACHADO, MAURICIO F. M.; et al. Cysteine proteases as potential targets for anti-trypanosomatid drug discovery. Bioorganic & Medicinal Chemistry, v. 46, SEP 15 2021. (18/25747-5, 16/25112-4, 19/05936-0)