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Produção de metacaspases de leveduras com truncamento do N-terminal e contendo mutações sítio dirigidas e caracterização bioquímica destas enzimas

Processo: 19/05936-0
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de julho de 2019 - 30 de junho de 2021
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Mauricio Ferreira Marcondes Machado
Beneficiário:Mauricio Ferreira Marcondes Machado
Instituição-sede: Pró-Reitoria Acadêmica. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Campus da Sede Mogi das Cruzes. Mogi das Cruzes , SP, Brasil
Pesq. associados:Maria Aparecida Juliano ; Wagner Alves de Souza Júdice
Assunto(s):Clonagem  Enzimas proteolíticas  Cinética  Substratos 

Resumo

O presente projeto de pesquisa é uma continuidade do projeto anterior, caracterização bioquímica de caspases-símile envolvidas no ciclo celular de eucariotos simples (FAPESP - 2015/11190-0), durante a execução do projeto observamos que as metacaspases de leveduras, que pertencem ao grupo I desta classe de enzimas, apresentam na porção N-terminal uma sequencia rica em glutamina e asparagina que promove a agregação proteica destas moléculas impossibilitando sua solubilidade e consequentemente impedindo a sua caracterização bioquímica. Por esse motivo esse projeto de pesquisa tem como objetivo a clonagem destas enzimas com a deleção da região N-terminal. As metacaspases sofrem um auto-processamento para tornarem-se cataliticamente ativas, e necessitam do íon cálcio como co-fator enzimático tanto para o seu auto-processamento como para realizarem sua atividade enzimática, por esse motivo pretendemos realizar a produção destas enzimas contendo mutações sítio dirigidas em resíduos chaves para atividade enzimática e nos locais de seu auto-processamento, para tentarmos elucidar a importância deste auto-processamento para a regulação da atividade destas proteases. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DALIO, FERNANDA M.; MACHADO, MAURICIO F. M.; MARCONDES, MARCELO F.; JULIANO, MARIA A.; CHAGAS, JAIR R.; CUNHA, RODRIGO L. O. R.; OLIVEIRA, VITOR. CPP-Ala-Ala-Tyr-PABA inhibitor analogs with improved selectivity for neurolysin or thimet oligopeptidase. Biochemical and Biophysical Research Communications, v. 522, n. 2, p. 368-373, FEB 5 2020. Citações Web of Science: 0.

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