Avaliação de moduladores da atividade de proteases envolvidas em processos patológicos

Resumo

Proteases estão envolvidas em muitos processos fisiológicos atendendo a demanda metabólica e funcional dos organismos aos quais elas participam. Entretanto, em muitas situações essas mesmas proteases podem deflagrar processos indesejados estabelecendo patologias nos seres humanos. Portanto, a modulação de suas atividades é uma forma de controlar suas ações em mecanismos patogênicos como progressão tumoral, metástase, processamento de capsídio viral, processamento de toxinas bacterianas, na facilitação da invasão de microorganismos parasitários e fungos. Dentre estas proteases temos as cisteíno proteases lisossomais catepsinas B e L. Catepsinas, além de seu papel nos processos metastáticos, também é responsável por um importante papel na execução do programa apoptótico em vários tipos de linhagens tumorais sendo que esta enzima necessita ser tanslocada do lisossomo para o citosol, onde degrada proteínas envolvidas na apoptose. Catepsinas estão envolvidas na morte celular programada e senescência, e no controle da proliferação e diferenciação de células. Por suas ações deletérias no organismo humano, essas proteases tornam-se interessantes alvos para o desenvolvimento de novos fármacos. Neste contexto, nosso objetivo é avaliar duas famílias de moléculas, um pertencente aos alquiltriazólicos e alquilfosfolipides (21 moléculas) e outra pertencente aos organometálicos de paládio (8 moléculas). Para tanto, realizaremos triagem de atividade inibitória, determinação do potencial inibitório IC50, determinação de mecanismo de inibição e constante de dissociação do inibidor Ki, determinação das constantes microscópicas pertencentes ao Ki=k -3/k3 por meio de cinéticas "time course", docagem molecular tendo os dados cinéticos como parâmetros balizadores para modelagem. Realizaremos avaliação da citotoxicidade e mecanismos de ação dos compostos sobre linhagens de células leucêmicas utilizando citometria de fluxo e determinação do tipo de morte celular. (AU)