Produção de metacaspases de leveduras com truncamento do N-terminal e contendo mutações sítio dirigidas e caracterização bioquímica destas enzimas

Resumo

O presente projeto de pesquisa é uma continuidade do projeto anterior, caracterização bioquímica de caspases-símile envolvidas no ciclo celular de eucariotos simples (FAPESP - 2015/11190-0), durante a execução do projeto observamos que as metacaspases de leveduras, que pertencem ao grupo I desta classe de enzimas, apresentam na porção N-terminal uma sequencia rica em glutamina e asparagina que promove a agregação proteica destas moléculas impossibilitando sua solubilidade e consequentemente impedindo a sua caracterização bioquímica. Por esse motivo esse projeto de pesquisa tem como objetivo a clonagem destas enzimas com a deleção da região N-terminal. As metacaspases sofrem um auto-processamento para tornarem-se cataliticamente ativas, e necessitam do íon cálcio como co-fator enzimático tanto para o seu auto-processamento como para realizarem sua atividade enzimática, por esse motivo pretendemos realizar a produção destas enzimas contendo mutações sítio dirigidas em resíduos chaves para atividade enzimática e nos locais de seu auto-processamento, para tentarmos elucidar a importância deste auto-processamento para a regulação da atividade destas proteases. (AU)