Caracterização bioquímica de caspases-símile envolvidas no ciclo celular de eucariotos simples

Resumo

O ciclo de vida é determinado basicamente pelos processos de divisão, diferenciação e morte. Nos últimos anos, estudos mostraram o envolvimento de uma família de proteases envolvidas na morte celular programada em mamíferos, em organismos eucarióticos simples como fungos e protozoários (metacaspases), em metazoários, bem como no ameboide Dictyostelium sp (paracaspases), entretanto, poucos são os estudos sobre a funcionalidade bioquímicos dessas proteases. No presente projeto pretendemos realizar o estudo bioquímicos para a determinação dos parâmetros cinéticos (KM, kcat e kcat/KM) da metacaspases de Trypanossoma brucei (TbMCA2) eSaccharomyces cerevisiae (YCA1) e da paracaspase de Dictyostelium discoideum, com isso estudar a especificidade, avaliarmos qual o efeito de sais, pH e temperatura na atividade proteolítica destas proteases. Recentemente foi descrito a importância do cálcio no funcionamento destas proteases, pretendemos realizar ensaios cinéticos com as enzimas selvagens e contendo mutações sítio dirigidas, variando a concentração destes íons e averiguarmos qual a importância do mesmo na relação estrutura-atividade destas proteases, avaliando o efeito do cálcio nos parâmetros físico-químicos das metacaspases e paracaspase. Pretendemos implementar em nosso laboratório uma cultura de Dictyostelium discoideum para estudos posteriores da ação das caspases-símile (metacaspases e paracaspases) sobre o ciclo de vida e comunicação celular deste modelo celular. (AU)