Avaliação lipidômica, de expressão gênica e de criotolerância em embriões bovinos cultivados in vitro com lipossomos

• Processo: 24/12714-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira
• Beneficiário: Alexandre Mendes de Almeida Junior
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências e Letras (FCL-ASSIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Assis. Assis , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11747-6 - Remota ou presencial: a importância da comunicação nos processos reprodutivos, AP.TEM
• Assunto(s): Técnicas in vitro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: co-cultivo embrionário | embrião bovino | embriotoxicidade | lipossomo | produção in vitro | vesículas lipídicas pequena e grande | produção in vitro de embriões bovinos

Resumo

A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos representa uma biotecnologia crucial para a reprodução e melhoramento genético de rebanhos, dada a importância econômica global da pecuária. No entanto, apesar do crescente interesse e investimento nesse campo, a PIVE ainda enfrenta desafios significativos, como a baixa taxa de produção e a qualidade dos embriões, que ainda são distintos daqueles derivados in vivo. O objetivo, com este projeto de pesquisa, é investigar os processos de interação de vesículas lipídicas sintéticas, que podem atuar como carreadoras de moléculas e hormônios sinalizadores, presentes no ambiente materno, para o desenvolvimento embrionário. Assim, serão estudados três modelos de vesículas com tamanho (grande ou pequeno) e configuração lamelar (uni ou multilamelares) distintas. Após padronização da formação e avaliação de sua estabilidade em condições de incubação embrionárias (0, 24 e 48 horas, por espalhamento dinâmico de luz), as vesículas serão co-cultivadas com embriões a partir do D5 (dias pós-inseminação, sendo o dia da FIV o D0). A taxa de blastocisto e de eclosão (D7 a D9) será um indicativo morfológico de eventual toxicidade, bem como a análise de expressão gênica em amostras dos grupos controle e tratados. Serão testadas diferentes composições lipídicas (fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfoinositídeo e colesterol) e concentrações (2, 4 e 6 mmol/L) para cada tipo de vesícula. Por fim, serão realizadas análises de lipidômica (MRM profiling), de criotolerância (vitrificação e posterior aquecimento para detectar as taxas de expansão e de eclosão) e de expressão gênica (plataforma Biomark HD, com um amplo painel gênico) nos embriões produzidos com as mais promissoras vesículas. As descobertas não apenas fornecerão insights valiosos sobre a interação entre as vesículas e os embriões, como também orientarão futuras pesquisas e aplicações práticas na área da reprodução assistida em bovinos - como a mudança de lipídeos em sua composição ou a incorporação, nas vesículas, de proteínas ou de moléculas sinalizadoras não lipídicas.