Avaliação da interação das proteínas FecR rLIC10902 e rLIC20185 de Leptospira interrogans com células humanas e expressão heteróloga em Leptospira não patogênica

• Processo: 24/14302-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 24 de janeiro de 2025
• Data de Término da vigência: 23 de julho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Beneficiário: João Pedro Gaspar Inácio
• Supervisor: Jenifer Coburn
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Medical College of Wisconsin (MCW), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 23/08486-1 - "Caracterização estrutural, funcional e imunogênica de duas proteínas de Leptospira interrogans contendo domínios FecR", BP.MS
• Assunto(s): Expressão heteróloga Biotecnologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: expressão heteróloga | leptospira biflexa | Proteínas FecR | Biotecnologia

Resumo

A L. interrogans é o principal agente etológico da leptospirose, uma zoonose amplamente disseminada que infecta aproximadamente 1 milhão de pessoas por ano. A infecção está intimamente relacionada às proteínas de membrana externa (OMPs) dessa bactéria, pois são as primeiras estruturas a interagir com as moléculas do hospedeiro. Assim, o estudo dessas proteínas é extremamente importante para entender os mecanismos de patogenicidade dessas bactérias. Apesar de as proteínas que contém o domínio FecR serem bem estudadas em Escherichia coli e geralmente relacionadas ao metabolismo do ferro, seu papel em L. interrogans não está elucidado. Atualmente, as proteínas FecR Lsa19, Lsa33 e LipL45 já foram descritas como adesinas de L. interrogans. Dados anteriores obtidos pelo nosso grupo demonstraram que as proteínas FecR rLIC10902 e rLIC20185 interagiram com moléculas da matriz extracelular (ECM) e receptores celulares in vitro. Portanto, este projeto visa validar o papel biológico de LIC10902 e LIC20185 como possíveis adesinas de L. interrogans patogênica. As proteínas-alvo, previamente clonadas no vetor pAE, serão produzidas em E. coli e purificadas por cromatografia de afinidade metálica. Os genes-alvo serão clonados em pMaOri sob o controle do promotor da proteína LipL32, para expressão em Leptospira biflexa. A interação de proteínas purificadas e L. biflexa recombinante com linhagens de células humanas será avaliada por ensaios de ligação e microscopia de imunofluorescência. Além disso, camundongos serão infectados com L. biflexa recombinante para avaliar seu padrão de disseminação e colonização de órgãos. A experiência da Dra. Coburn e de seu grupo será essencial para esclarecer o papel dessas possíveis adesinas na infecção por L. interrogans, aprimorando assim o conhecimento nesta área.