Estabelecimento de ferramentas para o estudo do envolvimento da NEK1 e NEK8 na ciliogênese e organogênese em organoides de rim e culturas celulares 3D

• Processo: 24/21937-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2025
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Pedro Rafael Firmino Dias
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/15126-9 - Duas famílias de proteínas reguladoras do ciclo celular: de estudos funcionais e uso como novos marcadores diagnósticos e alvos terapêuticos em câncer, AP.TEM
• Assunto(s): Neoplasias Mutação Proteínas quinases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | Mutações | Proteina quinase | mecanismos de sinalização, câncer

Resumo

A família das NEKs consiste de 11 membros de proteína quinases, envolvidas na regulação do ciclo celular, da mitose, do metabolismo do cílio primário, mecanismos de reparo de DNA e funções mitocondriais. Foi demonstrado a relação das NEK1 e NEK8 no metabolismo do cílio primário e alteração da função da NEK1 e NEK8 estão relacionados a quadros fisiopatológicos renais. O foco desse projeto é estabelecer ferramentas para futuros estudos dos papéis das NEK1 e NEK8 na ciliogênese e organogênese de cultivos celulares 3D de organoides de rim. Células tronco embrionárias (hiPSCs) serão cultivadas e as condições de indução da organogênese de rim de organoides 3D serão estabelecidas. Esses organoides podem gerar túbulos renais proximais e distais, incluindo podócitos e ductos coletores. Em seguida essas células serão transfectadas com NEK1/8 selvagem ou com mutações identificadas em ciliopatias. Também serão realizadas knock out de células de linhagem renal e hiPSCs pelo método de Crispr Cas 9 das NEK1/8. Os organoides resultantes serão caracterizados microscopicamente referente a organogênese alterada e ciliogênese celular. Estas ferramentas serão destinadas a futuros estudos moleculares e celulares de sinalização, proliferação, apoptose e no teste inibidores de quinase comerciais específicos da NEK1/8 e análogos de ATP como novos candidatos descobertos em outras frentes desse projeto temático e a influência desses inibidores na organogênese e ciliogênese.