Avaliação da ativação do inflamassoma pela proteína Natterina-like codificada pelo gene loc795232 em zebrafish

• Processo: 24/16448-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
• Pesquisador responsável: Carla Lima da Silva
• Beneficiário: Felipe Justiniano Pinto
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/07467-1 - CeTICS - Centro de Toxinas, Imuno-Resposta e Sinalização Celular, AP.CEPID
• Assunto(s): Proteína 9 associada à CRISPR Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Edição de RNA Evolução Peixe-zebra
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cas9 | Crispr | edição gênica | Evolução | Familia Natterina | função imune | Zebrafish | Ganho e perda de função gene

Resumo

O Thalassophryne nattereri, conhecido como niquim, é um peixe peçonhento do Brasil, causador de acidentes de importância médica. Estudos do nosso grupo identificaram no veneno deste peixe uma nova família de proteínas, as Natterinas, com atividade cininogenásica e capazes de reproduzir sintomas do envenenamento humano em camundongos. Em 2021 a família Natterina cresceu, sendo incorporadas 331 espécies que codificam 859 genes natterina ou natterina-like, dentre elas está o zebrafish, que possui 10 genes que codificam 11 proteínas natterina-like, como a proteína NP_001013322.1 codificada por aep1 e XP_017212453.1 codificada pelo gene LOC795232, que possuem um papel crucial no desenvolvimento embrionário. O zebrafish tem se destacado como um poderoso modelo devido à sua homologia genética com humanos, contribuindo para estudos de perda e ganho de funções, auxiliando na descoberta de funções proteicas até então não caracterizadas, além disso, é um modelo valioso para investigar a inflamação e os mecanismos de defesa do hospedeiro. Estudos em zebrafish têm elucidado a ativação do inflamassoma NLRP3, demonstrando semelhanças com mecanismos em mamíferos, apesar das diferenças evolutivas. Zebrafish expressa proteínas essenciais para a formação do inflamassoma, como asc, nlrp3, caspase-a e gsdm. Sua utilização em infecções bacterianas revela mecanismos inflamatórios e respostas imunes inacessíveis geneticamente em outros modelos, destacando-se como uma ferramenta eficaz para compreender papéis importantes de macrófagos e neutrófilos na defesa do hospedeiro contra diversas bactérias, incluindo Salmonella enterica sorovar Typhimurium (ST). Neste projeto iremos silenciar o gene da natterina-like utilizando CRISPR/Cas9 para avaliar a ação da molécula na defesa imune do organismo contra a gram-negativa Salmonella typhimurium e a ativação do complexo inflamassoma. Acreditamos ser possível confirmar a importância de proteínas da família Natterina como moléculas efetoras de defesa imune em zebrafish sua capacidade de interação com membros do complexo inflamassoma.