Caracterização funcional do lncRNA52 em sua interação com LbrISWI em Leishmania braziliensis

• Processo: 25/09918-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2025
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Angela Kaysel Cruz
• Beneficiário: Brenda Nobile de Freitas
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/03015-0 - Da epigenética, variabilidade genômica e regulação da expressão gênica em Leishmania, AP.TEM
• Assunto(s): Expressão gênica Leishmania RNAs não codificadores Parasitologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: expressão gênica | leishmania | RNAs não codificadores | Parasitologia Molecular

Resumo

Leishmania (Viannia) braziliensis é o principal agente etiológico da leishmaniose tegumentar no Brasil. Ao longo de seu ciclo de vida digenético, o parasita alterna entre o vetor flebotomíneo e o hospedeiro mamífero, enfrentando transições ambientais e fisiológicas drásticas. Diferentemente dos eucariotos mais complexos, a expressão gênica em Leishmania é majoritariamente regulada em nível pós-transcricional. Nesse contexto, os RNAs não codificadores (ncRNAs), atuando de forma independente ou como componentes de complexos ribonucleoproteicos, desempenham papéis cruciais na modulação da expressão gênica. Análises transcriptômicas comparativas entre os três principais estágios de desenvolvimento de L. braziliensis identificaram RNAs longos não codificadores (lncRNAs) diferencialmente expressos (DE) de maneira estágio-específica. Entre eles, destaca-se o lncRNA52, transcrito a partir de uma região intergênica no cromossomo 1, identificado in silico como preferencialmente expresso em amastigotas, a forma intracelular nos macrófagos do hospedeiro mamífero. A caracterização funcional por meio de ensaios de RNA pulldown in vitro e imunoprecipitação de RNA (RIP) in vivo revelou que o lncRNA52 interage com diversas proteínas, destacando-se a LbISWI, uma ATPase remodeladora de cromatina pertencente à família ISWI (Imitation Switch). Este projeto tem como objetivo elucidar o papel funcional do lncRNA52 e sua interação molecular com a proteína LbISWI ao longo do ciclo de vida do parasita. Os objetivos específicos incluem: (i) validar os padrões de expressão estágio-específicos do lncRNA52 e da LbISWI nos três principais estágios do ciclo de vida do parasita; (ii) determinar a localização subcelular do lncRNA52 e da LbISWI; (iii) identificar os parceiros de interação da LbISWI do RIP; (iv) identificar proteínas que interagem com o lncRNA52 em amastigotas; (v) avaliar os efeitos do nocaute (KO) e da superexpressão (OE) do lncRNA52 sobre a expressão e a distribuição subcelular da LbISWI; (vi) investigar o impacto recíproco do do KO e da OE da LbISWI sobre a abundância e a localização do lncRNA52. Ao dissecar a interação funcional entre um RNA não codificador longo e um fator de remodelamento de cromatina, este estudo busca revelar novos mecanismos regulatórios que sustentam a expressão gênica em Leishmania, ampliando assim nossa compreensão sobre a biologia do parasita e apontando potenciais alvos para intervenção terapêutica. (AU)