Monitoramento, localização e função de ncRNA diferencialmente expressos em Leishmania braziliensis por RNA FISH multi-color a nível subcelular

• Processo: 21/15182-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Angela Kaysel Cruz
• Beneficiário: José Carlos Quilles Junior
• Supervisor: Susanne Kramer
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Universität Würzburg, Alemanha
• Vinculado à bolsa: 20/00088-9 - Regulação epigenética da expressão gênica em Leishmania, BP.PD
• Assunto(s): Parasitologia molecular RNAs não codificadores Corantes fluorescentes Leishmania braziliensis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fluorescent Probes | leishmania | multi-colour FISH RNA | non-coding RNAs | Parasitologia Molecular

Resumo

A descoberta de RNAs não codificadores (ncRNAs) que atuam como elementos regulatórios tem contribuído significativamente para o desenvolvimento e controle de muitos aspectos do ponto de vista celular e molecular. Em Leishmania, os ncRNAs ainda são pouco explorados, principalmente a nível funcional. A organização genética desses parasitas transfere para o nível pós-transcricional o controle da expressão gênica que não é apenas, mas fortemente baseado no destino e estabilidade do mRNA, atividade de tradução e modulação da degradação de proteínas. Nós identificamos previamente um vasto número de ncRNAs diferencialmente expressos (DE ncRNAs) durante o ciclo de vida de L. braziliensis, sugerindo que tais ncRNAs podem desempenhar funções relevantes em um estágio de vida específico do parasita. Para investigar a função regulatória putativa, selecionamos 50 DE ncRNAs entre aqueles previstos in silico, com base no nível de expressão diferencial. Eles incluem transcritos intergênicos e localizados em Switch Strand Region (SSR). Para dez deles, confirmamos a existência como transcrições independentes e fenótipos ligados ao ncRNA nocaute ou superexpressão estão em andamento (conforme apresentado no relatório científico do Brasil em anexo). Considerando tais relevantes informações sobre ncRNA em L. braziliensis, pretendemos aqui investigar o tráfego e a estabilidade de dez espécies de RNA no interior da célula do parasita por RNA FISH de dupla cor usando microscopia confocal, explorando seu comportamento e localização intracelular em diferentes morfologias do parasita e em condições específicas, a fim de melhor compreender a sua real função. Ao final, esperamos reunir informações relevantes sobre essa classe de RNA para elucidar o quão estáveis eles são e para onde vão dentro da célula, estudo não relatado na Leishmania até agora. (AU)