Uma triagem de alto rendimento para doenças mitocondriais

• Processo: 26/18877-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2026
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Leonardo dos Reis Silveira
• Beneficiário: Priscila Romano Raimundo
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/08207-5 - Novo caminho para a termogênese: o receptor nuclear Nr2f6 no músculo esquelético, AP.TEM
• Assunto(s): Biogênese de organelas Fatores de transcrição Metabolismo energético
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biogenese Mitocondrial | Células c2c12 | Fator de transcrição | High-Throughput Screening | Metabolismo energético | Nr2f6 | Fatores de Transcrição e Regulação da Biogênese Mitocondrial

Resumo

Doenças metabólicas, incluindo obesidade e diabetes mellitus tipo 2, estão associadas a alterações que comprometem o metabolismo celular, a homeostase redox e a função mitocondrial. Fatores de transcrição (TFs) regulam programas de expressão gênica envolvidos no metabolismo energético, e sua disfunção está diretamente associada a doenças metabólicas. A regulação de complexos transcricionais em promotores de genes mitocondriais representa uma importante oportunidade terapêutica e fornece uma estratégia valiosa para a avaliação da biogênese e da função mitocondrial por meio de ensaios celulares baseados em repórteres. Apesar dos avanços na descoberta de fármacos, as abordagens atuais de triagem de alto rendimento (high-throughput screening, HTS) frequentemente falham em refletir com precisão a biogênese mitocondrial e a capacidade bioenergética celular. Portanto, estratégias de triagem robustas e fisiologicamente relevantes são necessárias para identificar compostos que atuem efetivamente sobre a função mitocondrial. A plataforma foi estabelecida na linhagem celular C2C12 e é composta por três etapas sequenciais. Na Etapa 1, os compostos foram triados utilizando o ensaio com MitoTracker Deep Red para verificar a indução de biogênese mitocondrial, seguido de confirmação por meio do sistema repórter pMitoTag-DsRED. Na Etapa 2, a função mitocondrial será avaliada por meio da mensuração do consumo de oxigênio em células tratadas com os compostos selecionados na Etapa 1. Na Etapa 3, construções repórter de luciferase/GFP serão utilizadas para avaliar a atividade transcricional de vias regulatórias associadas à biogênese mitocondrial em células tratadas com os compostos selecionados na Etapa 2. Essa plataforma de HTS fornece uma estratégia robusta e precisa para identificar compostos que promovam a biogênese e a função mitocondrial. Até o momento, os candidatos selecionados demonstram efeitos consistentes, sustentando seu potencial para validação adicional como agentes terapêuticos para doenças metabólicas. Além disso, será dada ênfase especial ao Receptor Nuclear Subfamília 2 Grupo F Membro 6 (NR2F6), um receptor nuclear órfão que participa do controle transcricional de vias metabólicas associadas à homeostase energética, à função mitocondrial e à adaptação celular ao estresse metabólico. Como receptor órfão, seu ligante endógeno permanece desconhecido, o que o torna um alvo atraente para a identificação de novos moduladores farmacológicos. Estudos anteriores do nosso laboratório demonstraram que o NR2F6 exerce um papel repressivo sobre genes de termogênese muscular, incluindo Serca e sarcolipina, bem como sobre o metabolismo de ácidos graxos. Esses achados destacam o NR2F6 como um promissor alvo terapêutico para distúrbios metabólicos. Nesse contexto, propomos a busca por compostos químicos/naturais com atividade repressora sobre o Nr2f6. Assim, essa abordagem se apresenta como uma estratégia útil para a validação de alvos moleculares capazes de modular a biogênese mitocondrial e/ou a repressão do NR2F6. (AU)