Expressão estável da giroxina fusionada à EGFP em células de mamíferos

• Processo: 10/01625-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Geraldo Santana Magalhães
• Beneficiário: Sergio Domingos da Silva Filho
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem Vetores genéticos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células de mamíferos | clonagem | Egfp | expressão | Giroxina | vetores | Toxinologia

Resumo

Devido a sua complexidade de composição, atualmente as toxinas presentes nos venenos de serpentes estão sendo muito estudadas a fim de se descobrir novos fármacos ou ferramentas biológicas. Contudo, os estudos destas moléculas veem-se comprometidos devido à pequena quantidade de toxina obtida e dificuldade de captura e manutenção do animal. Para solucionar estes problemas, organismos heterólogos têm sido utilizados para o isolamento e expressão de genes de toxinas, a fim de obtê-las puras e em grande quantidade. Contudo, muitas toxinas apresentam modificações pós-traducionais e não podem ser expressas por sistemas procarióticos. As células de mamíferos por serem altamente especializadas em realizar diversas modificações pós-traducionais, representam um grande potencial para a expressão de moléculas mais complexas. A toxina giroxina, uma serino protease tipo trombina símile, presente no veneno da serpente Crotalus durissus terrificus, apresenta pontes de sulfeto e glicosilação, o que a torna uma molécula candidata para ser expressa neste sistema eucariótico. Portanto, neste trabalho, pretendemos expressar em células de mamíferos esta toxina fusionada à EGFP. Dessa forma, a identificação dos clones mais promissores poderá ser feita de maneira rápida e eficiente. Além disto, esta construção poderá contribuir para estudos futuros da localização/ligação da giroxina em tecidos alvos, colaborando na melhor compreensão da ação desta toxina no envenenamento. (AU)