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Clonagem, expressão, purificação e estudos estruturais da septina humana 10

Processo: 07/54715-0
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2007
Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
Área de conhecimento:Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
Pesquisador responsável:João Alexandre Ribeiro Gonçalves Barbosa
Beneficiário:Lorrayne Faddoul Cabral de Mello
Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
Assunto(s):Clonagem   Expressão de proteínas   Cristalização   Septinas   Ciclo celular
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Ciclo Celular | Clonagem | Cristalizacao | Estudos Estruturais | Expressao | Septina

Resumo

Para que a divisão celular ocorra é necessário que uma célula passe por algumas etapas que possibilitem esta divisão. Ao conjunto destes processos denomina-se ciclo celular. A regulação espacial e temporal destes processos é fundamental para a preservação celular e do material genético. Falha neste processo pode levar à morte celular ou a alterações genéticas causando divisão desregulada e crescimento de tumores. Dentre diversas proteínas envolvidas no ciclo celular, encontram-se as septinas. Até o momento, foram encontrados em humanos 13 diferentes genes para septinas. Neste trabalho será realizada a clonagem, expressão, purificação e estudos estruturais da septina humana 10." Os cDNA destas septinas e a seqüência nucleotídica referente ao domínio GTPase+C-terminal foram amplificados e clonados no vetor pGEM-T-easy vector (Promega) em nosso laboratório. Estas construções serão clonadas para expressão em sistema procarioto. As proteínas deverão ser purificadas por métodos cromatográficos para a realização dos ensaios de cristalização. Uma vez purificada, a proteína será analisada por Dynamic light scatterting (DLS), dicroísmo circular e fluorescência. Testes de cristalização serão realizados utilizando kits disponíveis em nosso laboratório. (AU)

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