Expressão da proteína cinase humana Nek9 para estudos estruturais e funcionais

• Processo: 08/09996-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Jéssica Santana Bernachi
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias Ciclo celular Centrossomos Quinases relacionadas a NIMA Interação proteína-proteína Expressão de proteínas Purificação de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | centrossomo | ciclo celular | onco proteína | função e estrutura de proteínas

Resumo

A proteína cinase NIMA é um regulador pleiotrópico da progressão da mitose indispensável em Aspergillus nidulans. A Nek9/Nercc1 é uma proteína humana da família de NIMA cinases que regula o alinhamento dos cromossomos e sua segregação na mitose. Seu domínio catalítico bastante conservado entre as Neks (NIMA related kinases) é seguido de um domínio regulatório C-terminal contendo uma região homóloga à RCC1, um segmento rico em Ser/Thr/Pro e um motivo coiled-coil de dimerização. A Nek9 interage com outras proteínas da família, Nek6 e Nek7, e se liga especificamente à RanGTPase através de seu domínio catalítico e da região similar à RCC1. Ela existe como um homodímero que se auto-ativa in vitro por auto-fosforilação na Thr210 e é ativada in vivo durante a mitose, envolvendo uma pequena fração do total de proteína na célula. A microinjeção de anticorpos anti-Nek9 em prófase resulta em anormalidades do fuso mitótico e/ou desalinhamento cromossômico, retendo as células na prometáfase ou levando a uma segregação cromossômica aberrante e à aneuploidia. A Nek9 e seus parceiros de interação Nek6 e Nek7 representam, assim, uma nova cascata de sinalização que regula a progressão da mitose. Neste projeto, pretendemos realizar a identificação de proteínas que interagem com a Nek9 através de ensaio de duplo-híbrido em levedura, no sentido de comparamos com os resultados recentemente obtidos para a Nek6 e traçarmos o perfil de interações que constitui a cascata de sinalização das Neks 6, 7 e 9 durante a mitose. Em paralelo, serão realizadas a expressão e purificação da Nek9 inteira e versões truncadas para ensaios biofísicos e de cristalização, visando análises estruturais da proteína sozinha e em complexos. (AU)