Expressão e purificação de proteínas que interagem com FEZ1 para estudos estruturais e funcionais

• Processo: 05/00621-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2005
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Marcos Rodrigo Alborghetti
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Oncoproteínas Proteína FEZ1 humana Elementos estruturais de proteínas Expressão de proteínas Purificação de proteínas DNA complementar
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Estrutura De Proteinas | Onco Proteina | Proteina Reguladora | Regulacao De Transcricao | Sinalizacao | Estudo funcional e estrutural de proteinas

Resumo

A proteinoquinase NEK1 foi descrita nos últimos anos em células de mamíferos, principalmente em germinativas. O envolvimento desta proteína na etiologia da doença renal policística (PKD) progressiva - a principal anomalia genética observada em humanos - foi indicado em mutantes pontuais em nek1 de camundongos. Através de ensaios de duplo-híbrido, realizados em nosso laboratório, utilizando uma biblioteca de cDNA de cérebro fetal humano como presa e o domínio regulatório de NEK1 como isca, a proteína FEZ1 foi identificada pela interação com esta proteína. A proteína FEZ1 (Fasciculation and Elongation protein Zeta-1) é uma proteína coiled-coil que foi inicialmente identificada por ser um ortólogo da proteína UNC-76 de Caenorhabditis elegans, necessária para a formação e o alongamento normal dos feixes de axônios neste verme. Embora não tenha sido demonstrada a participação da proteína FEZ1 na mesma via que leva à PKD, os efeitos pleiotrópicos das mutações em nek1 atingem o sistema nervoso e o desenvolvimento embrionário. Isso e a expressão abundante de FEZ1 no cérebro e durante todas as fases de desenvolvimento de ratos, permitem sugerir que esta possa ser candidata à substrato de hNEK1 in vivo. Experimentos posteriores permitiram verificar que as proteínas humanas BAF60a, SAP30L e uma proteína homóloga a bamacan, entre outras, interagiram com a proteína FEZ1 em ensaios de duplo-híbrido. BAF60a está relacionada à processos de remodelagem da cromatina. SAP30L é homóloga à SAP30 que se associa ao complexo de repressão de transcrição Sin3. Uma série de funções tem sido atribuídas para a proteína homóloga à bamacan em eucariotos, as quais parecem apontar para mecanismos que podem ligar sua superexpressão ao crescimento celular desregulado. Neste projeto pretendemos subclonar os cDNAs que codificam as estas três últimas proteínas mencionadas em vetores de expressão para sua posterior análise estrutural e funcional. As proteínas expressas e purificadas serão utilizadas em ensaios de Pull Down, dicroísmo circular cristalização. Em conjunto, esses estudos visam uma melhor compreensão da relação estrutura/função dessas proteínas e da proteína FEZ1 com a qual elas interagem.