Identificacao das moleculas do complexo de pre-replicacao de trypanosomas

• Processo: 07/51345-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
• Beneficiário: Luis Antonio Nogueira Junior
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 05/00154-1 - Identificação das origens e da maquinária de replicação em células de Trypanosoma, AP.JP
• Assunto(s): Replicação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cdc6 | Orc | Replicacao | Trypanosomas

Resumo

O objetivo do nosso laboratório é estudar a replicação em trypanosomas. A replicação tem início com a associação de um complexo composto por 6 proteínas ORC1-6 a pontos de origens de replicação no DNA. Análise do genoma de T. cruzi e T. brucei mostrou que diferente dos demais eucariontes, os trypanosomas não apresentam seqüências gênicas para as seis proteínas Orc. Ao contrário, apresentam uma região aberta de leitura que codificaria para uma proteína homóloga tanto a Orc quanto a Cdc6. Esta última associa-se ao complexo ORC1-6, recrutando aos pontos de origem de replicação o complexo MCM2-7, fundamental para replicação. Análise do genoma de trypanosomas mostrou ainda que falta, nestes organismos, a proteína Cdt1, fundamental para o controle da replicação nos demais eucariontes. Nosso laboratório gerou anticorpos contra esta proteína putativa Orc/Cdc6 de T. cruzi e T. brucei, que reconhecem uma banda de massa molecular esperada em extratos de parasitas. A fim de identificar as moléculas que participam da maquinaria de pré-replicação em trypanosomas, pretendemos realizar imunoprecipitações com os anticorpos gerados e identificar, por espectrometria de massa, as moléculas que são imunoprecipitadas juntamente com Orc/Cdc6. Pretendemos também gerar linhagens de T. cruzi que expressem Orc/Cdc6 fundida a epitopos tag, para que o extrato destes parasitas possa ser purificado em coluna de afinidade. As bandas obtidas da eluição destas colunas também serão analisadas por espectrometria de massa. (AU)