Avaliação da inibição da apoptose em neutrófilos de ratos expostos agudamente a fumaça de cigarro: um proposta de estudo da patogenia do enfisema pulmonar

• Processo: 02/08955-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
• Pesquisador responsável: Paulo Hilário Nascimento Saldiva
• Beneficiário: Daniella Karassawa Zanoni
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neutrófilos Tabagismo Hábito de fumar Enfisema Apoptose Citometria de fluxo Expressão de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apoptose | Citometria De Fluxo | Enfisema | Fas | Neutrofilos | Tabagismo

Resumo

Este trabalho tem como objetivo avaliar a expressão da proteína Fas em neutrófilos do sangue periférico de animais expostos à fumaça de cigarro e quantificar a apoptose destas células por citometria de fluxo. Ratos Wistar adultos serão expostos em câmara de tabagismo, onde sofrerão exposição única à fumaça durante duas horas a uma concentração de 50 ppm de monóxido de carbono. Os animais serão sacrificados após tempos determinados, em grupos de 5 animais: 0, 4, 12, 24 e 48 horas após o término da exposição. A expressão do Fas será pesquisada por técnica de imunofluorescência direta utilizando anticorpo monoctonal (CD95) marcado com Ficoeritrina (PE), cuja emissão é captada no espectro de 580nm ±30 e registrada no detector FL2. A região de neutrófilos será selecionada de acordo com os padrões de granularidade (registrado no detector SSC) e de tamanho (registrado no detector FSC). Será utilizado controle isotípico para ajuste de autofluorescência seguido de análise no programa CellQuest. A apoptose será mensurada avaliando-se a fração de células positivas para Anexina V marcada com Isotiocianato de Fluoresceína (FITC) cuja emissão é captada no espectro de 515nm ±30 e registrada no detector FL1. (AU)