Clonagem e expressão em bactéria da enzima glicoquinase da levedura Saccharomyces cerevisiae com vistas à cristalização e estudos estruturais

• Processo: 00/04259-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2000
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira
• Beneficiário: Naiara Sardinha Pinto
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem Hexoquinase Saccharomyces cerevisiae Cristalografia de proteínas Elementos estruturais de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Cristalografia De Proteinas | Glicoquinase | Hexoquinase | Repressao Por Glicose | Saccharomyces Cerevisiae

Resumo

As hexoquinases são enzimas que catalisam a transferência de um grupo fosfato para uma hexose. Sua atividade está envolvida em passos importantes do metabolismo de carboidratos em diversos organismos. As glicoquinases são hexoquinases que possuem especificidade por glicose como substrato. A glicoquinase de levedura participa do processo de repressão por glicose, juntamente com as isozimas hexoquinase PI e PII, desempenhando um papel diferenciado nesse fenômeno, participando apenas da reação a curto prazo do organismo à adição de glicose do meio. Entretanto, é alta a homologia (36%) entre glicoquinase e hexoquinase em leveduras, de forma que a sequência primária da glicoquinase não fornece base para se investigar o que confere à enzima o seu papel particular na repressão por glicose. Acreditamos que a determinação da estrutura cristalográfica da glicoquinase de Saccharomyces cerevisiae fornecerá subsídios para tal investigação. Além disso, mutações na glicoquinase humana estão relacionadas a diabetes e a estrutura da glicoquinase de levedura pode contribuir para a descrição da glicoquinase humana. Adicionalmente, a estrutura cristalográfica de glicoquinase de levedura é uma importante peça para se entender a história evolutiva das hexoquinases. Assim, pretendemos clonar e expressar em Escherichia coli a glicoquinase de Saccharomyces cerevisiae e após isso realizar ensaios de cristalização da proteína para investigações da sua estrutura tridimensional. (AU)