Clonagem e expressão em bactérias das enzimas hexoquinase PI e PII de Saccharomyces cerevisiae com vistas à cristalização e estudos estruturais

• Processo: 00/04260-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2000
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira
• Beneficiário: Anders Goncalves da Silva
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem Expressão gênica Hexoquinase Saccharomyces cerevisiae Cristalografia de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Cristalografia De Proteinas | Expressao Genica | Hexoquinase | Repressao Por Glicose | Saccharomyces Cerevisiae

Resumo

Hexoquinases são enzimas fundamentais no metabolismo de hexoses catalisando a transferência de grupo fosfato de ATP para a 6-hidroxila do açúcar. Em Saccharomyces cerevisiae, elas existem em duas isoenzimas: hexoquinase PI (Hxk1) e hexoquinase PII (Hxk2) e, além de sua importante função catalítica, é atribuída às hexoquinases uma função regulatória da repressão por glicose. A repressão por glicose é o processo metabólico mais importante para as leveduras, no qual ocorre a supressão, na presença de glicose, da expressão de genes relacionados ao metabolismo de fontes de carbono alternativas à glicose. Aparentemente, as hexoquinases, principalmente a Hxk2, estão envolvidas na inicialização do processo de repressão e na manutenção da repressão catabólica. No entanto, o processo ainda não foi totalmente elucidado; mas, sugere-se que o mecanismo poderia estar associado a mudanças conformacionias sofridas pelas enzimas quando se ligam ao substrato, a hexose, e/ou quando catalisam a reação de fosforilação e/ou quando liberam o produto, o 6-fosfoester. Assim, pretendemos clonar, expressar em Escherichia coli, purificar e cristalizar as hexoquinases PI e PII de S. cerevisiae; com vistas a realizar ensaios de cristalografia das proteínas. Acreditamos que, com a análise da estrutura terciária dessas moléculas, poderemos contribuir para a melhor compreensão do papel desempenhado pelas hexoquinases nos mecanismos regulatórios da repressão por glicose. (AU)