Identificacao de fatores celulares que interagem fisicamente com lia1 por meio do rastreamento de duplo-hibrido.

• Processo: 08/50478-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Sandro Roberto Valentini
• Beneficiário: Laura Marise de Freitas
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Saccharomyces cerevisiae Fator de iniciação 5A em eucariotos Hipusina Duplo-híbrido
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Desoxihipusina Hidroxilase | Desoxihipusina Sintase | Duplo-Hibrido | Elf5A | Hipusina | Saccharomyces Cerevisiae

Resumo

A síntese de hipusina é uma modificação pós-traducional única e essencial que ocorre somente no provável fator de início de tradução de eucariotos 5A (elF5A). Enquanto que a enzima desoxihipusina sintase catalisa a formação de desoxihipusina no precursor de elFSA, posterior hidroxilação deste intermediário pela enzima desoxihipusina hidroxilase gera a forma madura hipusinada. Apesar do requerimento indispensável de elF5A e hipusina no crescimento celular, a função biológica desempenhada por este fator intrigante permaneceu obscura por décadas. Recentemente, novas evidências fortalecem o envolvimento de elF5A na tradução, mas o seu mecanismo de ação ainda precisa ser elucidado. Com o objetivo de identificar proteínas que interagem com elF5A que pudessem contribuir para a elucidação de sua função, foi realizado um rastreamento de duplo-híbrido através do qual um novo parceiro físico foi revelado, a proteína codificada pelo gene YJR070C, denominado LIA1 (Ligante de elF5A) pelo nosso laboratório. Entretanto, este dado não contribuiu para a determinação do papel de elF5A dentro da célula, pois a função exercida por Liai era naquele momento desconhecida. A recente clonagem de LIA1 como o gene codificador da enzima desoxihipusina hidroxilase culminou na completa identificação das enzimas da via de síntese de hipusina no precursor de elF5A. No entanto, o mecanismo pelo qual elF5A contendo desoxihipusina é hidroxilado é totalmente desconhecido. Como o rastreamento por duplo-híbrido tem-se revelado de grande importância para a compreensão dos processos biológicos que ocorrem em uma célula, pois vem sendo amplamente empregado na elucidação da função de diferentes fatores celulares através da análise de interações proteína-proteína, o presente projeto visa a busca de ligantes físicos de Liai através do emprego desta técnica. Espera-se que o encontro dos parceiros físicos de Liai auxilie não apenas para a demonstração de que o processo de hipusinação é regulado in vivo, mas também para o próprio entendimento desta etapa da modificação pós-traducional de elF5A. (AU)