Clonagem e expressão em Pichia pastoris de fragmentos de miosina cardíaca humana para o mapeamento de epitopos de reatividade cruzada entre cardíaca e proteína B13 de Trypanosoma cruzi

• Processo: 99/00772-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 1999
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2000
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia
• Pesquisador responsável: Arthur Gruber
• Beneficiário: Fernando Augusto de Abreu
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 96/01440-7 - Imunopatogênese da cardiopatia chagásica crônica humana: estudo multidisciplinar da relevância biológica do mimetismo antigênico miosina cardíaca - B13, AP.TEM
• Assunto(s): Autoimunidade Mapeamento de epitopos Trypanosoma cruzi Cardiomiopatia chagásica Miosinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Autoimunidade | Cardiopatia | Mapeamento De Epitopos | Miosina Cardiaca | Proteina B13 | Trypanosoma Cruzi

Resumo

Há uma série de relatos do envolvimento da autoimunidade na patogênese da cardiopatia chagásica crônica, mas a identificação dos antígenos-alvo no coração é pouco conhecida. O nosso grupo identificou um epitopo de miosina cardíaca humana (MCH) com reatividade cruzada com a proteína B13 de T. cruzi, preferencialmente reconhecido por cardiopatas chagásicos. Como parte de um Projeto Temático (FAPESP 96/1440-7), nosso laboratório ficou responsável pela subclonagem e expressão de segmentos de cDNA de MCH, e a purificação das respectivas proteínas. No projeto de IC de Matias Diez (FAPESP 97/07281-0) esta tarefa foi parcialmente executada, obtendo-se clonagem dos 5 fragmentos propostos. Contudo, 2 dos 5 subclones não apresentaram expressão em E. coli. No presente projeto de IC propõe-se a clonagem e expressão desses 2 fragmentos na levedura metilotrófica Pichia pastoris. Estas proteínas serão utilizadas em ensaios de mapeamento de epitopos de reatividade cruzada, os quais deverão ser realizados pela equipe do Dr. Jorge Kalil, coordenador do projeto. (AU)