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Atividade prolil dipeptidil aminopeptidase iv e sua relacao com o calcio e a despolarizacao em sinaptossomas do hipocampo e hipotalamo do rato.

Processo: 05/01631-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de dezembro de 2005
Vigência (Término): 30 de novembro de 2006
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Comparada
Pesquisador responsável:Paulo Flávio Silveira
Beneficiário:Leonardo Zambotti Villela
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Sistema nervoso central   Neuropeptídeos   Endocrinologia   Neuromodulação

Resumo

Dentre os processos que ocorrem na sinapse está a degradação enzimática dos neurotransmissores. A prolil dipeptidil aminopeptidase IV pertence ao grupo restrito de enzimas que especificamente reconhecem a prolina em peptídeos. Contrastando com a reconhecida importância dos neurotransmissores peptídicos susceptíveis de hidrólise por esta enzima, são escassas as informações sobre sua atividade no sistema nervoso central. Neste projeto, pretendemos estudar a atividade prolil dipeptidil aminopeptidase IV na forma solúvel e particulada em sinaptossomas de hipocampo e hipotálamo de ratos, bem como as alterações dessas formas e a exocitose da enzima, em função de alterações do cálcio intra- e extracelular e estímulo de despolarização de membrana. Os sinaptossomas serão obtidos por centrifugação em gradiente de densidade descontínua de sacarose e incubados em diferentes condições de concentrações de cálcio e potássio. A mensuração fluorimétrica da atividade prolil dipeptidil aminopeptidase IV será realizada nos incubados e nas frações solúvel e de membrana dos sinaptossomas, conjuntamente com a medida espectrofotométrica do teor protéico. Os principais parâmetros cinéticos e inibição dessa atividade enzimática serão caracterizados. O processo de obtenção dos sinaptossomas será avaliado por microscopia eletrônica. A integridade dos sinaptossomas, após a incubação, bem como o rendimento do processo de obtenção das frações solúvel e de membrana, serão avaliados pela medida espectrofotométrica da desidrogenase láctica. A análise de Western blot irá avaliar se as alterações detectadas de atividade enzimática correspondem a alterações de expressão da(s) enzima(s) correspondente(s).