Expressão heteróloga e purificação de fatores transcricionais e proteínas transcricionalmente reguladas pela concentração extracelular de oxigênio para determinação de estrutura tridimensional

• Processo: 03/13517-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2004
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Hamza Fahmi Ali El-Dorry
• Beneficiário: Cesar Moises Camilo
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 03/00042-3 - Análise da rede metabólica produtora de energia em microorganismos eucarióticos, AP.TEM
• Assunto(s): Expressão de proteínas Purificação de proteínas Trichoderma reesei Escherichia coli Cromatografia líquida
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cromatografia Liquida | Escherichia Coli | Expressao Proteica | Purificacao Proteica | Trichoderma Reesei

Resumo

A montagem de complexos de pré-iniciação específicos em promotores, em que são fundamentais as interações proteína-proteína e proteína-DNA, é um passo determinante na regulação transcricional da expressão em eucariotos. Embora uma quantidade considerável de informações a respeito dessas interações esteja disponível, o conhecimento das estruturas tridimensionais dos complexos regulatórios de expressão gênica em eucariotos é restrito. Nesse projeto pretendemos expressar e purificar o fator geral de transcrição TBP ("TATA-box binding protein"), o coativador MBF1 ("Multiprotein bridging factor 1") e o fator de transcrição BTF3 ("RNAPolymerase B transcription factor 3") do fungo filamentoso Trichoderma reesei para posteriores estudos estruturais dos complexos formados por essas proteínas e suas interações com outras proteínas e o DNA. O coativador MBF1 está envolvido no metabolismo de aminoácidos em Saccharomyces cerevisiae, sendo um efetor positivo da transcrição do gene his3, cujo produto é parte da via de síntese de novo de histidina. Durante a investigação em escala genômica da regulação da expressão gênica de T. reesei pela disponibilidade de oxigênio (Bonnacorsi et al., em preparação), observou-se que tanto o coativador MBF1 como o fator de transcrição BTF3 têm sua expressão modulada por hipóxia. (AU)