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Clonagem e caracterização de enzimas epóxido hidrolases de Trichoderma reesei

Processo: 15/03329-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de outubro de 2015
Vigência (Término): 25 de março de 2018
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Felipe Santiago Chambergo Alcalde
Beneficiário:Gabriel Stephani de Oliveira
Instituição-sede: Escola de Artes, Ciências e Humanidades (EACH). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):16/12859-4 - Identificação de substratos e inibidores de epóxido hidrolases de Trichoderma reesei, BE.EP.DD
Assunto(s):Enzimologia   Epóxido hidrolases   Clonagem   Trichoderma reesei   Cromatografia líquida de alta eficiência

Resumo

As enzimas são importantes moléculas biológicas amplamente estudadas e utilizadas em atividades econômicas. Enzimas epóxido hidrolases catalisam a hidrólise de epóxidos a seus correspondentes dióis, e diversos estudos demonstram seu grande potencial para aplicação biotecnológica em processos industriais e de biorremediação. Neste projeto são descritas as etapas já concluídas no período de mestrado, como a identificação e caracterização de dois genes codificadores de enzimas epóxido hidrolases (TrEH 1 e TrEH 2) do fungo Trichoderma reesei, bem como a clonagem no vetor de expressão pProEX-HTa (Life Technologies, USA), expressão em Escherichia coli BL 21, e purificação da enzima epóxido hidrolase 2 (TrEH 2). Os ensaios preliminares desenvolvidos demonstram atividade enzimática e enantioseletividade sobre o substrato óxido de estireno (epóxido). Para a continuidade do projeto (doutorado direto) propõe-se a expressão e purificação da proteína recombinante TrEH 1 e com as duas enzimas (TrEH 1 e TrEH2), pretende-se realizar a caracterização cinético-enzimática, testes de determinação da enantioseletividade por cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e predições estruturais. Esta proposta é pioneira na descrição e caracterização das enzimas epóxido hidrolases do fungo Trichoderma reesei. (AU)

Publicações científicas (5)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DE OLIVEIRA, GABRIEL S.; ADRIANI, PATRICIA P.; RIBEIRO, JOAO AUGUSTO; MORISSEAU, CHRISTOPHE; HAMMOCK, BRUCE D.; DIAS, MARCIO VINICIUS B.; CHAMBERGO, FELIPE S. The molecular structure of an epoxide hydrolase from Trichoderma reesei in complex with urea or amide-based inhibitors. International Journal of Biological Macromolecules, v. 129, p. 653-658, MAY 15 2019. Citações Web of Science: 0.
DE OLIVEIRA, GABRIEL S.; ADRIANI, PATRICIA P.; WU, HAO; MORISSEAU, CHRISTOPHE; HAMMOCK, BRUCE D.; CHAMBERGO, FELIPE S. Substrate and inhibitor selectivity, and biological activity of an epoxide hydrolase from Trichoderma reesei. MOLECULAR BIOLOGY REPORTS, v. 46, n. 1, p. 371-379, FEB 2019. Citações Web of Science: 0.
WILSON, CAROLINA; DE OLIVEIRA, GABRIEL S.; ADRIANI, PATRICIA P.; CHAMBERGO, FELIPE S.; DIAS, MARCIO V. B. Structure of a soluble epoxide hydrolase identified in Trichoderma reesei. BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-PROTEINS AND PROTEOMICS, v. 1865, n. 8, p. 1039-1045, AUG 2017. Citações Web of Science: 3.
DEOLIVEIRA, GABRIEL STEPHANI; ADRIANI, PATRICIA PEREIRA; BORGES, FLAVIA GARCIA; LOPES, ADRIANA RIOS; CAMPANA, PATRICIA T.; CHAMBERGO, FELIPE S. Data set of optimal parameters for colorimetric red assay of epoxide hydrolase activity. DATA IN BRIEF, v. 8, p. 436-440, SEP 2016. Citações Web of Science: 1.
DE OLIVEIRA, GABRIEL STEPHANI; ADRIANI, PATRICIA PEREIRA; BORGES, FLAVIA GARCIA; LOPES, ADRIANA RIOS; CAMPANA, PATRICIA T.; CHAMBERGO, FELIPE S. Epoxide hydrolase of Trichoderma reesei: Biochemical properties and conformational characterization. International Journal of Biological Macromolecules, v. 89, p. 569-574, AUG 2016. Citações Web of Science: 6.

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