Clonagem e caracterização da enzima epóxido hidrolase de Trichoderma reesei.

Autor(es)

Gabriel Stephani de Oliveira

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2018-05-16

Membros da banca

Felipe Santiago Chambergo Alcalde; Cristiane Rodrigues Guzzo Carvalho; Fernanda Marques da Cunha; Viviane Abreu Nunes Cerqueira Dantas; Elen Aquino Perpetuo; Roberto Kopke Salinas

• Orientador: Felipe Santiago Chambergo Alcalde

Resumo

Epóxido hidrolases (EHs) são enzimas que catalisam a hidrólise de epóxidos a seus correspondentes dióis, apresentam potencial aplicação biotecnológica (separação de enantiômeros na produção de fármacos), estão envolvidas no metabolismo de ácidos graxos poliinsaturados e inibidores de EHs estão sendo estudados para possível utilização no tratamento de doenças. Uma enzima epóxido hidrolase (TrEH) do fungo filamentoso Trichoderma reesei QM9414 foi clonada, expressa, purificada e caracterizada funcionalmente e estruturalmente. A atividade de TrEH foi determinada com o substrato óxido de estireno (racêmico), demonstrando maior atividade nas temperaturas de 23 a 50 °C, no pH 7,2 a 37 °C, e as constantes cataliticas Km= 4,6 mM e kcat= 336 s-1. A enzima recombinante mostrou ser enantiosseletiva, pois hidrolisa preferencialmente (S)-(-)-óxido de estireno, (R)-(-)- epicloridrina e (S)-(-)-1,2-epoxibutano. Moléculas inibidoras da atividade de TrEH foram identificadas e algumas delas inibem até 60% o crescimento de T. reesei. A estrutura terciária de TrEH (1,7 Å) foi determinada por cristalografia, apresenta dobramento α/β-hidrolase e não tem alta homologia com nenhuma outra estrutura de EH. TrEH é uma nova enzima epóxido hidrolase solúvel cujas propriedades mostram seu potencial de utilização em aplicações biotecnológicas. (AU)

• Processo FAPESP: 15/03329-9 - Clonagem e caracterização de enzimas epóxido hidrolases de Trichoderma reesei
• Beneficiário: Gabriel Stephani de Oliveira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto