Desvendando os mecanismos de regulação gênica a nível de células únicas em Trichoderma reesei

• Processo: 16/03763-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rafael Silva Rocha
• Beneficiário: Luísa Czamanski Nora
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 12/22921-8 - Abordagens de biologia sintética para decifrar os mecanismos de integração de sinais em promotores bacterianos complexos, AP.JP
• Bolsa(s) vinculada(s): 18/02227-6 - Engenharia de linhagens de leveduras para atingir melhores rendimentos de degradação de biomassa, BE.EP.MS
• Assunto(s): Biotecnologia de alimentos Regulação da expressão gênica Redes reguladoras de genes Enzimas celulolíticas Fungos filamentosos Trichoderma reesei
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Promotores de celulases | Redes reguatórias | Regulação gênica | Regulação Gênica

Resumo

Enzimas celulolíticas produzidas por fungos filamentosos tem sido o foco de muitos estudos atuais devido à sua capacidade de degradar resíduos agrícolas e consequente potencial de aplicação biotecnológico em biorrefinarias. O Trichoderma reesei é o principal modelo de estudo para produção destas enzimas e tem mostrado resultados promissores na busca por organismos melhorados que geram maiores rendimentos. Muitas técnicas já foram utilizadas para mostrar que este fungo possui uma complicada rede de regulação molecular que controla a expressão dessas proteínas dependendo do substrato, porém, uma análise a nível de células únicas nunca foi realizada para desvendar o que está por trás deste mecanismo. Dentre o complexo de celulases, as enzimas Cel6A e Cel7A se destacam por seu papel na degradação de celulose. Em vista disso, este projeto propõe realizar a clonagem de promotores desses dois genes em vetores recombinantes contendo as proteínas repórteres mCherry e GFP, transformá-los nas linhagens parental QM9414 e mutante xyr crescidos em três fontes de carbono diferentes, e analisar a expressão deles célula a célula através de microscopia de fluorescência. Além disso, um potencial novo elemento cis-regulatório identificado no promotor do gene cel6a será analisado através da construção de promotores mutantes. Assim, será possível não só comprovar a funcionalidade de promotores de celulases de T. reesei, mas também analisar como é a resposta molecular desse organismo para degradar fontes de carbono complexas e comparar a expressão de dois genes ao mesmo tempo ao nível de células únicas. (AU)

Publicações científicas

(6)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

NORA, LUISA CZAMANSKI; WESTMANN, CAUA ANTUNES; MARTINS-SANTANA, LEONARDO; ALVES, LUANA DE FATIMA; OLIVEIRA MONTEIRO, LUMMY MARIA; GUAZZARONI, MARIA-EUGENIA; SILVA-ROCHA, RAFAEL. The art of vector engineering: towards the construction of next-generation genetic tools. MICROBIAL BIOTECHNOLOGY, v. 12, n. 1, p. 125-147, JAN 2019. (16/19179-9, 17/17924-1, 16/06323-4, 16/05472-6, 16/03763-3, 15/04309-1, 12/22921-8)

CAMPOS ANTONIETO, AMANDA CRISTINA; VIEIRA NOGUEIRA, KAROLINE MARIA; DE PAULA, RENATO GRACIANO; NORA, LUFSA CZAMANSKI; ANZOLINI CASSIANO, MURILO HENRIQUE; GUAZZARONI, MARIA-EUGENIA; ALMEIDA, FAUSTO; DA SILVA, THIAGO APARECIDO; RIES, LAURE NICOLAS ANNICK; DE ASSIS, LEANDRO JOSE; et al. A Novel Cys2His2 Zinc Finger Homolog of AZF1 Modulates Holocellulase Expression in Trichoderma reesei. MSYSTEMS, v. 4, n. 4, JUL-AUG 2019. (16/23233-9, 16/03322-7, 15/04309-1, 17/04217-5, 16/03763-3, 18/03766-8, 15/09553-8, 12/22921-8)

LUÍSA CZAMANSKI NORA; RELBER AGUIAR GONÇALES; LEONARDO MARTINS-SANTANA; BEATRIZ HENRIQUES FERREIRA; FERNANDO RODRIGUES; RAFAEL SILVA-ROCHA. Synthetic and minimalist vectors for Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of fungi. GENETICS AND MOLECULAR BIOLOGY, v. 42, n. 2, p. 395-398, 2019-06-13. (16/03763-3, 16/01946-3, 14/22561-7, 12/22921-8)

MARTINS-SANTANA, LEONARDO; NORA, LUISA C.; SANCHES-MEDEIROS, ANANDA; LOVATE, GABRIEL L.; CASSIANO, MURILO H. A.; SILVA-ROCHA, RAFAEL. Systems and Synthetic Biology Approaches to Engineer Fungi for Fine Chemical Production. FRONTIERS IN BIOENGINEERING AND BIOTECHNOLOGY, v. 6, OCT 3 2018. (15/22386-3, 17/17924-1, 16/11093-8, 17/04217-5, 16/03763-3, 12/22921-8)

NORA, LUISA CZAMANSKI; WESTMANN, CAUA ANTUNES; GUAZZARONI, MARIA-EUGENIA; SIDDAIAH, CHANDRANAYAKA; GUPTA, VIJAI KUMAR; SILVA-ROCHA, RAFAEL. Recent advances in plasmid-based tools for establishing novel microbial chassis. BIOTECHNOLOGY ADVANCES, v. 37, n. 8, DEC 2019. (16/03763-3, 15/04309-1, 16/05472-6, 12/22921-8)

NORA, LUISA CZAMANSKI; WESTMANN, CAUA ANTUNES; MARTINS-SANTANA, LEONARDO; ALVES, LUANA DE FATIMA; OLIVEIRA MONTEIRO, LUMMY MARIA; GUAZZARONI, MARIA-EUGENIA; SILVA-ROCHA, RAFAEL. The art of vector engineering: towards the construction of next-generation genetic tools. MICROBIAL BIOTECHNOLOGY, v. 12, n. 1, p. 23-pg., 2019-01-01. (16/05472-6, 16/06323-4, 17/17924-1, 16/19179-9, 16/03763-3, 12/22921-8, 15/04309-1)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

NORA, Luísa Czamanski. Desenvolvimento de ferramentas de biologia sintética aplicadas a fungos de importância médica e industrial. 2019. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.