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Desvendando os mecanismos de regulação gênica a nível de células únicas em Trichoderma reesei

Processo: 16/03763-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2016
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2019
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
Pesquisador responsável:Rafael Silva Rocha
Beneficiário:Luísa Czamanski Nora
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:12/22921-8 - Abordagens de biologia sintética para decifrar os mecanismos de integração de sinais em promotores bacterianos complexos, AP.JP
Bolsa(s) vinculada(s):18/02227-6 - Engenharia de linhagens de leveduras para atingir melhores rendimentos de degradação de biomassa, BE.EP.MS
Assunto(s):Regulação da expressão gênica

Resumo

Enzimas celulolíticas produzidas por fungos filamentosos tem sido o foco de muitos estudos atuais devido à sua capacidade de degradar resíduos agrícolas e consequente potencial de aplicação biotecnológico em biorrefinarias. O Trichoderma reesei é o principal modelo de estudo para produção destas enzimas e tem mostrado resultados promissores na busca por organismos melhorados que geram maiores rendimentos. Muitas técnicas já foram utilizadas para mostrar que este fungo possui uma complicada rede de regulação molecular que controla a expressão dessas proteínas dependendo do substrato, porém, uma análise a nível de células únicas nunca foi realizada para desvendar o que está por trás deste mecanismo. Dentre o complexo de celulases, as enzimas Cel6A e Cel7A se destacam por seu papel na degradação de celulose. Em vista disso, este projeto propõe realizar a clonagem de promotores desses dois genes em vetores recombinantes contendo as proteínas repórteres mCherry e GFP, transformá-los nas linhagens parental QM9414 e mutante xyr crescidos em três fontes de carbono diferentes, e analisar a expressão deles célula a célula através de microscopia de fluorescência. Além disso, um potencial novo elemento cis-regulatório identificado no promotor do gene cel6a será analisado através da construção de promotores mutantes. Assim, será possível não só comprovar a funcionalidade de promotores de celulases de T. reesei, mas também analisar como é a resposta molecular desse organismo para degradar fontes de carbono complexas e comparar a expressão de dois genes ao mesmo tempo ao nível de células únicas.

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CAMPOS ANTONIETO, AMANDA CRISTINA; VIEIRA NOGUEIRA, KAROLINE MARIA; DE PAULA, RENATO GRACIANO; NORA, LUFSA CZAMANSKI; ANZOLINI CASSIANO, MURILO HENRIQUE; GUAZZARONI, MARIA-EUGENIA; ALMEIDA, FAUSTO; DA SILVA, THIAGO APARECIDO; RIES, LAURE NICOLAS ANNICK; DE ASSIS, LEANDRO JOSE; GOLDMAN, GUSTAVO HENRIQUE; SILVA, ROBERTO NASCIMENTO; SILVA-ROCHA, RAFAEL. A Novel Cys2His2 Zinc Finger Homolog of AZF1 Modulates Holocellulase Expression in Trichoderma reesei. MSYSTEMS, v. 4, n. 4 JUL-AUG 2019. Citações Web of Science: 1.
LUÍSA CZAMANSKI NORA; RELBER AGUIAR GONÇALES; LEONARDO MARTINS-SANTANA; BEATRIZ HENRIQUES FERREIRA; FERNANDO RODRIGUES; RAFAEL SILVA-ROCHA. Synthetic and minimalist vectors for Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of fungi. GENETICS AND MOLECULAR BIOLOGY, v. 42, n. 2, p. 395-398, Jun. 2019. Citações Web of Science: 1.
NORA, LUISA CZAMANSKI; WESTMANN, CAUA ANTUNES; MARTINS-SANTANA, LEONARDO; ALVES, LUANA DE FATIMA; OLIVEIRA MONTEIRO, LUMMY MARIA; GUAZZARONI, MARIA-EUGENIA; SILVA-ROCHA, RAFAEL. The art of vector engineering: towards the construction of next-generation genetic tools. MICROBIAL BIOTECHNOLOGY, v. 12, n. 1, p. 125-147, JAN 2019. Citações Web of Science: 3.
MARTINS-SANTANA, LEONARDO; NORA, LUISA C.; SANCHES-MEDEIROS, ANANDA; LOVATE, GABRIEL L.; CASSIANO, MURILO H. A.; SILVA-ROCHA, RAFAEL. Systems and Synthetic Biology Approaches to Engineer Fungi for Fine Chemical Production. FRONTIERS IN BIOENGINEERING AND BIOTECHNOLOGY, v. 6, OCT 3 2018. Citações Web of Science: 5.

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