Desvendando os mecanismos de regulação gênica a nível de células únicas em Trichoderma reesei

Resumo

Enzimas celulolíticas produzidas por fungos filamentosos tem sido o foco de muitos estudos atuais devido à sua capacidade de degradar resíduos agrícolas e consequente potencial de aplicação biotecnológico em biorrefinarias. O Trichoderma reesei é o principal modelo de estudo para produção destas enzimas e tem mostrado resultados promissores na busca por organismos melhorados que geram maiores rendimentos. Muitas técnicas já foram utilizadas para mostrar que este fungo possui uma complicada rede de regulação molecular que controla a expressão dessas proteínas dependendo do substrato, porém, uma análise a nível de células únicas nunca foi realizada para desvendar o que está por trás deste mecanismo. Dentre o complexo de celulases, as enzimas Cel6A e Cel7A se destacam por seu papel na degradação de celulose. Em vista disso, este projeto propõe realizar a clonagem de promotores desses dois genes em vetores recombinantes contendo as proteínas repórteres mCherry e GFP, transformá-los nas linhagens parental QM9414 e mutante xyr crescidos em três fontes de carbono diferentes, e analisar a expressão deles célula a célula através de microscopia de fluorescência. Além disso, um potencial novo elemento cis-regulatório identificado no promotor do gene cel6a será analisado através da construção de promotores mutantes. Assim, será possível não só comprovar a funcionalidade de promotores de celulases de T. reesei, mas também analisar como é a resposta molecular desse organismo para degradar fontes de carbono complexas e comparar a expressão de dois genes ao mesmo tempo ao nível de células únicas. (AU)