Construção de promotores sintéticos para expressão de celulases usando novos elementos cis-regulatórios em Trichoderma reesei

Resumo

O estudo de microrganismos produtores de enzimas lignocelulolíticas para degradação da biomassa vegetal possuem um alto interesse biotecnológico para a geração de produtos industriais de alto valor agregado. Nesse sentido, o fungo Trichoderma reesei se destaca como grande produtor de celulases e hemicelulases e é objeto de estudos para a criação de ferramentas de engenharia genética que propiciem seu melhoramento para novos processos. Nesse organismo, a ação de fatores de transcrição que controlam a expressão de genes de celulases e hemicelulases vem sendo amplamente estudada. Esta regulação está ligada à interação dos fatores de transcrição com regiões específicas dos promotores destes genes, os chamados elementos cis-regulatórios. O presente plano de trabalho visa a construção de promotores sintéticos através da identificação computacional e caracterização funcional de elementos cis-regulatórios relacionados à regulação da expressão de genes envolvidos na degradação da biomassa vegetal. Para tal, ensaios de validação serão realizados mediante a análise das cinéticas de expressão dos promotores de celulases fusionados à GFP via integração cromossômica em T. reesei. Do mesmo modo, promotores sintéticos serão construídos utilizando-se novos elementos cis-regulatórios identificados e seus comportamentos caracterizados. Os objetivos propostos deverão contribuir para um aumento nos conhecimentos acerca dos mecanismos moleculares de regulação transcricional em T. reesei. Além disso, espera-se o desenvolvimento de novas ferramentas de manipulação genética de T. reesei para aplicações biotecnológicas.