Subclonagem, expressão e purificação do gene penicilina G acilase de B.megaterium em E.coli

• Processo: 04/06984-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2007
• Área de conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Raquel de Lima Camargo Giordano
• Beneficiário: Mônica Rosas da Costa Iemma
• Instituição Sede: Centro de Ciências Exatas e de Tecnologia (CCET). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Bacillus megaterium Adsorção (química) Enzimas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Adsorcao | Bacillus Megaterium | Penicilina G Acilase | Purificacao | Subclonagem | Tecnologia De Enzimas

Resumo

Penicilina G Acilase (PGA) é importante enzima industrial usada principalmente na hidrólise de penicilina G e cefalosporina C para a produção dos ácidos 6-aminopenicilânico e 7-aminocefalosporânico, compostos chave na produção industrial de antibióticos tais como ampicilina, amoxicilina e cefalexina. Dentre os microrganismos produtores da enzima PGA, Bacillus megaterium é um dos poucos que a produz de modo extracelular, o que reduz custos dos onerosos procedimentos de purificação de biomolécutas. A produção de PGA por Bacillus megaterium vem sendo estudada há anos no DEQ-UFSCar, tendo-se conseguido mais que triplicar a produtividade em bioreator e definir protocolo de separação da enzima secretada. Entretanto, a produção industrial de PGA requer melhorias ainda maiores, o que pode ser obtido usando-se microrganismo recombinante. Projeto para clonagem e expressão da enzima recombinante em E. coli (intracelular), que vinha sendo desenvolvido com bons resultados, teve que ser interrompido. Este novo projeto visa não apenas realizar a sub-clonagem e expressão do gene PGA de Bacillus megaterium, etapas pendentes do projeto interrompido, mas também estudar uma nova técnica de separação de enzima intracelular, adsorção por troca iônica em aparato de fluxo em vórtice, para definição do protocolo a ser usado na separação da enzima recombinante. (AU)