Análise do padrão de expressão e das interações protéicas de uma nova isoforma da subunidade catalítica da proteína fosfatase 2 (PP2Ac)

• Processo: 08/10615-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Nilson Ivo Tonin Zanchin
• Beneficiário: Deivid Lucas dos Santos Migueleti
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão gênica Interação proteína-proteína Isoformas de proteínas Processamento alternativo Monoester fosfórico hidrolases Transdução de sinais DNA complementar
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: expressão gênica | fosfatases 2A | Interação proteína-proteína | Sinalização | Splicing alternativo | sinalização

Resumo

A capacidade de comunicação das células entre si e com o ambiente foi crucial para o surgimento de organismos multicelulares. Esta comunicação é possível graças a uma série de vias bioquímicas complexas que, conectadas em vários pontos, constituem as redes de sinalização celular. Estas redes possibilitam o processamento dos sinais para a geração de respostas celulares coordenadas e complexas. A transdução ou processamento dos sinais é feita por uma série de mecanismos, dentre os quais o mais comum é a fosforilação reversível de proteínas catalisada pelas quinases e fosfatases, associadas a verdadeiros complexos de sinalização. A fosfatase 2A (PP2A) é uma fosfatase de resíduos de serina/treonina, que atua em uma série de processos celulares vitais como replicação e reparo do DNA, transcrição, tradução, ciclo celular, transdução de sinais e apoptose. PP2A é formada por uma subunidade catalítica C, à qual geralmente está associada uma subunidade regulatória constante A. A este núcleo dimérico podem se associar uma série de subunidades regulatórias B, formando uma estrutura trimérica clássica A:B:C. As subunidades B identificadas já passam de 50 e desempenham papel na localização e especificidade de substratos de PP2A na célula. A subunidade catalítica pode ainda se associar a outras proteínas como a4 e TIPRL, além de sofrer uma série de alterações pós-traducionais importantes para sua regulação. PP2Ac é ativada através da metilação de sua cauda carbóxi-terminal pela enzima LCMT1 e inativada pela enzima PME-1. Durante as buscas por proteínas que interagem com a proteína TIPRL em nosso laboratório foi isolada uma nova isoforma da subunidade catalítica da PP2A. Esta isoforma, denominada neste trabalho de isoforma menor, não possui 55 aminoácidos codificados pelo exon 5, sendo que, na isoforma maior, esta região corresponde ao sítio de interação com as proteínas LCMT1 e PME-1, que regulam sua metilação. Dada a importância da PP2A para a viabilidade celular, este trabalho busca caracterizar genética e bioquimicamente esta nova isoforma da subunidade catalítica da PP2A. Para tal, serão feitos ensaios para amplificar o seu cDNA a partir de bibliotecas de cDNA, para testar a sua capacidade de estabelecer interações com as proteínas que interagem com a isoforma maior e, finalmente, será testada a capacidade de atuar sobre substratos e de ser regulada por metilação.