Estudo funcional da proteína Nip7p: análise do mecanismo de interação com RNA

• Processo: 07/54845-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Nilson Ivo Tonin Zanchin
• Beneficiário: Larissa Batista de Souza
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Interação proteína-proteína RNA Leveduras
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Interacao Rna-Proteina | Nip7P | Processamento De Pre-Rrna | Sintese De Ribosomos

Resumo

Em levedura os rRNAS 18S, 5.8S e 25S são sintetizados a partir de um único precursor de 35S que sofre processamento pós-transcricional para retirada das seqüências espaçadoras além de modificações covalentes, de metilação de bases e riboses e isomerização de uridinas em pseudo-uridinas. As análises funcionais desenvolvidas até o momento revelaram que a Nip7p participa do processamento do pré-rRNA intermediário de 27S que dá origem aos rRNAs de 5,8S e 25S. Os estudos de interação com RNA revelaram que a Nip7p tem preferência para interagir com RNAs ricos em uridina. Através de análises estruturais estamos desenvolvendo um processo de mapeando dos amino-ácidos da Nip7p responsáveis pelos contatos entre a Nip7p e o RNA. Além disso, pretendemos entender o mecanismo pelo qual a Nip7p apresenta maior afinidade a RNAS ricos em uridina. Para isso, um passo importante seria identificar o RNA específico com o qual a Nip7p interage in Vivo. O fato de ligar RNAs ricos em uridina muda nossa hipótese de trabalho já que a Nip7p deve interagir com os pequenos RNAs nucleolares e não diretamente com o pré-rRNA. Assim, o objetivo deste trabalho é identificar os RNAs celulares capazes de interagir com a Nip7p. A abordagem experimental envolve purificação por afinidade da Nip7p de células de levedura, e a análise dos RNAs que co-purificam com ela através Northern blots e de técnicas de RT-PCR e clonagem e sequenciamento de DNA. (AU)