Caracterizacao de uma sintetase de peptideos de fischerella sp. cena-19.

• Processo: 00/03677-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2000
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Augusto Etchegaray Júnior
• Beneficiário: Luciana Cosentino de Macedo
• Instituição Sede: Centro de Energia Nuclear na Agricultura (CENA). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 96/11193-7 - Importância de peptídeo antibióticos no controle biológico de Sclerotinia sclerotiorum, AP.JP
• Assunto(s): Western blotting
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fischerellinas | Sintetases De Peptideos | Western Blot

Resumo

A cianobactéria Fischerella sp. CENA-19, um isolado da Amazônia brasileira, produz o composto fischerelina A (FsA), que possui propriedades algicidas e fungicidas. FsA possui dois anéis que lembram o imino ácido prolina, ligados a uma cadeia de 14 átomos de carbono, contendo insaturações. Esta estrutura indica que a biossíntese de FsA pode envolver um sistema enzimático integrado, composto de uma sintetase de peptídeos (SPEP), e uma ou mais sintase de compostos policetônicos (SCPC). Utilizando anticorpos contra a seqüência YTSGTTGXPKG, uma assinatura de ligases de AMP, identificamos uma SPEP, após a análise de um extrato proteico de Fischerella sp. CENA-19 por Western blot. O tamanho desta SPEP (120 kDa) indica a provável ativação de um único amino ácido. Propomos o isolamento e a caracterização desta enzima para verificar o seu potencial envolvimento na biossíntese de FsA. A enzima seria purificada utilizando-se uma coluna de gel-filtração e uma coluna de interação hidrofóbica, monitorando-se a eluição por Western blot e pela intertroca ATP/[32P]PPi, ou técnica similar não radioativa, na presença de amino ácidos. Após a purificação, pretendemos obter a seqüência amino terminal da proteína para a síntese de um oligonucleotídeo que possa ser utilizado para identificar o gene que codifica esta SPEP. (AU)