Membranas plasmáticas e seu envolvimento no transporte de trealose em Saccharomyces cerevisiae

• Processo: 01/14035-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2002
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Pedro Soares de Araujo
• Beneficiário: Erik Montagna
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Membrana plasmática Leveduras Saccharomyces cerevisiae Trealose Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Leveduras | Membrana Plasmatica | Saccharomyces Cerevisiae | Transporte De Trealose | Trealose

Resumo

A expressão do gene AGT1 fundido ao gene da proteína fluorescente verde (GFP) na cepa 340-2B de Saccharomyces cerevisiae, permitirá o isolamento e a caracterização de frações purificadas de membranas plasmáticas contendo o produto de expressão deste gene - a quimera AGT1 -GFP, para a qual nossos resultados preliminares indicam que se localiza na membrana plasmática e tem atividade de transporte de trealose. A fração de membrana plasmática purificada em gradiente descontínuo de sacarose será caracterizada pelo doseamento de enzimas marcadoras específicas que nos darão parâmetros de contaminação por outras estruturas sub-celulares. Estas membranas serão usadas em ensaios de reconstituição da atividade de transporte de trealose, segundo protocolos bem estabelecidos na literatura para a obtenção de vesículas fechadas. A preparação de anticorpos policlonais a partir de fragmentos do gene AGT1, com baixa homologia com outros transportadores de açúcares em leveduras nos permitirá o estabelecimento de um imunoensaio que servirá para a quantificação da proteína AGT1 em condições que não possa ser ensaiada pela sua atividade de transporte. (AU)