Caracterização biológica de anticorpos recombinantes humanos anti-crotoxina (scFv) originais e mutantes, obtidos por mutagênese sítio-dirigida

• Processo: 08/06647-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunoquímica
• Pesquisador responsável: Irene Fernandes
• Beneficiário: Tamires Souza de Oliveira
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Mutagênese sítio-dirigida Venenos de serpentes Crotalus durissus terrificus Anticorpos de cadeia única Crotoxina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anticorpos recombinantes | Crotalus durissus terrificus | Crotoxina | mutagenese sítio-dirigida | ScFv | veneno de serpente | Imunoquímica

Resumo

A administração de anticorpos heterólogos, geralmente produzidos em cavalos, tem sido o tratamento de escolha para indivíduos que sofreram acidentes por venenos de serpentes. Entretanto, a administração destes anticorpos pode induzir reações adversas. Fragmentos menores de anticorpos contendo apenas os domínios VH e VL, conhecidos como Fv (fragmento variável, do inglês Fragment variable) e Fv de cadeia única (do inglês, single chain Fv ou scFv) foram construídos por engenharia genética visando evitar reações adversas. Os clones humanos scFv anti-CTX foram isolados de uma biblioteca não imune de 1010 fagos por CARDOSO et al., 2000. Os anticorpos scFv originais foram redesenhados pela tecnologia AbEvo (do inglês, Antibody Evolution) e obtidos em nosso laboratório por mutagênese sítio-dirigida. O Sistema AbEvo visa a otimização da afinidade e especificidade do anticorpo baseando-se na estrutura tridimensional do antígeno e do anticorpo, estipulada por um algoritmo evolutivo. O objetivo deste projeto é caracterizar os anticorpos recombinantes humanos scFv anti-crotoxina originais e mutantes quanto às suas atividades biológicas in vivo e in vitro: atividade enzimática da crotoxina (CTX), miotoxicidade induzida pela CTX e capacidade de neutralização da letalidade induzida pela CTX e pelo veneno de Crotalus durissus terrificus (Cdt).