Funcao e regulacao de um possivel gene antioxidante em saccharomyces cerevisiae.

• Processo: 00/01414-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Luis Eduardo Soares Netto
• Beneficiário: Daniela Cristina Munhoz
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 95/09710-0 - Oxidação de proteínas e atividade antioxidante da enzima 'Thiol Specific Antioxidant' (TSA), AP.JP
• Assunto(s): Regulação da expressão gênica Estresse oxidativo Antioxidantes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antioxidante | Estresse Oxidativo | Levedurs | Radical Livre | Regulacao Genica

Resumo

Tiorredoxina peroxidase (Tpx) é uma proteína de Saccharomyces cerevisiae, cuja função parece ser a de proteger biomoléculas contra inativação oxidativa. Tpx tem sido relacionado com vários processos fisiológicos como proliferação celular, apoptose, diferenciação celular e permeabilização mitocondrial entre outros. O gene de Tpx, denominado TSA1, apresenta similaridade com genes pertencentes a organismos de todos os reinos, inclusive no Homem. O gene YDR453C de leveduras apresenta alta homologia (86%) com TSA1. Desta forma, para estudar a sua função foi necessário isolá-lo (por PCR) a partir do DNA genômico de Saccharomyces cerevisiae e cloná-lo (a partir da ligação do produto de PCR ao plasmídeo pGEM e a posterior inserção deste na linhagem de E. coli DH 5alfa). Confirmamos a clonagem de YDR453C por sequenciamento automático e os passos seguintes serão a inserção do mesmo em um vetor de expressão (pET3a - NOVAGEN) para que seja possível a purificação e a determinação de uma possível atividade antioxidante da proteína YDR453Cp. Além disso, pretendemos produzir anticorpos contra YDR453Cp com os quais esperamos determinar o compartimento celular em que ela se encontra, bem como estudar sua síntese proteica por Western blot. Além disso, pretendemos interromper o gene YDR453C pelo método descrito por Rothstein (1983). Finalmente, estudaremos a expressão do gene YDR453C pelas técnicas de Northern e gene repórter. (AU)