Construcao do mapa fisico e genetico do cromossomo xvi(2,3 megabases) do clone cl brener de trypanosoma cruzi: isolamento e caracterizacao de sequencias repetitivas deste cromossomo.

• Processo: 99/05025-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 1999
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2000
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: José Franco da Silveira Filho
• Beneficiário: Renata Torres de Souza
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi Projeto genoma
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cromossomo Xvi | Mapa Fisico E Genetico | Projeto Genoma | Sequencias Repetitivas | Trypanossoma Cruzi | Yacs

Resumo

Isolamento e caracterização, (sequenciamento, número de cópias, mapeamento em cosmidios e YACs) de seqüências repetitivas específicas do cromossomo XVI. Estratégias: a) construção de biblioteca "cromossomo-específica" do cromossomo XVI utilizando-se o DNA purificado da banda XVI através de PFGE. Digestão do DNA cromossômico "com Hae III ou fragmentação através de nebulização, seleção dos fragmentos (1-4 kb) em gel de agarose e clonagem em vetor pUC18 digerido com Smal. Seleção dos clones recombinantes com o DNA da banda XVI marcado com fosforo radiativo. Serão utilizadas as condições de hibridização que favorecem a seleção de seqüências presentes em um grande número de cópias. b) Construção de uma biblioteca "dirigida" do cromossomo XVI. O DNA da banda XVI será digerido com HaeIII e os fragmentos separados através de eletroforese em gel de agarose. Os fragmentos HaeIII serão hibridizados com o DNA do cromossomo XVI marcado com fosforo radiativo. Os fragmentos que hibridizarem mais intensamente com a sonda serão clonados em pUC18. (AU)